《RNA干扰技术抑制急性白血病细胞THP-1中SALL4基因表达的研究》.pdfVIP

·1202· 生堡捡墼匡堂盘查垫!Q至!至旦筮塑鲞筮!兰魍垦堕翌』!坐丛鲤：望竺!坚些!垫!Q。坠!塑：堕!：!呈 ．基础实验诊断研究． RNA干扰技术抑制急性白血病细胞 THP一1中SALL4基因表达的研究 郭野陈倩崔巍 【摘要】 目的抑制SALL4基因在急性白血病细胞THP一1中的表达，探讨其在白血病发病机制 中的作用。方法将表达SALL4干扰序列的质粒载体转染至急性白血病细胞THP-l中，分为4组： (1)空白对照组：不加处理；(2)转染对照组：加入空pRS质粒载体；(3)转染一组：加入SALIA·shRNA- pRS．1干扰质粒的转染复合体；(4)转染二组：加入SALIA-shRNA-pRS-2干扰质粒的转染复合体。采 用实时荧光定量PCR和WB技术观察THP-1细胞中SALL4基因mRNA及蛋白表达的变化，建立抑制 SALL4表达的体系。实时荧光定量PCR检测SALL4受抑后Wnt／D—catenin信号通路中C—myc、Cyclin DI,13-catenin基因的表达改变，采用流式细胞术分析THP一1细胞凋亡情况。结果实时荧光定量 PCR结果显示，转染一组、转染二组、转染对照组、空白对照组SAL／A基因的表达水平分别为(36．0± 4．3)％、(32．0±2．4)％、(102．0±6．5)％、(100．0士2．6)％，差异有统计学意义(F=226．3，P 0．05)；转染一组、转染二组的SAL／A基因表达水平显著低于空白对照组，差异有统计学意义(t值分 别为19．7、19．1，PO．05)；转染对照组SALL4基因表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义 (f=1．1，P0．05)。WB检测结果显示，转染一组、转染二组SALIA蛋白表达与空白对照组和转染 对照组相比明显下降。以上基因和蛋白表达水平均提示SA／L4干扰效率良好。SALL4基因抑制表达 D1基因的表达分别为(44．0±6．2)％、(44．0± 后，转染一组C-myc基因、B-catenin基因、Cyclin 5．1)％和(107．0±13．6)％，转染二组为(22．0±4．5)％、(25．04-3．5)％和(48．0±7．6)％，转染对照 组为(42．0±3．5)％、(59．0±3．7)％及(79．0±5．6)％。转染一组、转染二组C-myc基因表达水平显 著低于空白对照组的(103．O±7．5)％，差异有统计学意义(t值分别为10．1、9．5，P均0．05)；转染 一组、转染二组fl-catenin基因的表达显著低于空白对照组的(100．0±4．1)％，差异有统计学意义 (t值分别为23．3、22．9，P均O．05)；转染一组、转染二组CyclinD1基因的表达显著低于空白对照组 的(102．04-6．0)％，差异有统计学意义(t值分别为17．4、12．4，P均0．05)。SALL4基因被抑制后， 转染一组、转染二组、转染对照组及空白对照组的细胞凋亡率分别为(57．2±9．1)％、(34．4± 8．6)％、(14．44-3．6)％及(14．8±4．8)％，差异有统计学意义(F=42．5，P0．05)。转染一组、转染 二组细胞凋亡率显著高于空白对照组(t值分别为9．7、4．5，P均0．05)。结论抑制急性白血病细 胞THP-1中SALL4基因表达后，Wnt／13．catenin信号通路的C-myc、CyclinDI及#-catenin基因的表达 随之下调，并促进了细胞凋亡。 【关键词】 白血病；细胞系，肿瘤；转录因子；RNA干扰；细胞凋亡 in THP-1 researchontheinhibitionofSALL4 acute leukemiacells Experimental expressionmyeloid RNAinterferenceGUO WeL Clinical by Ye，CHENQian，CUlDepartmentof Laboratory，融垤 UnionMedical Medical CollegeHospital，ChineseAcademyof Sciences，Beijing100730，C