《毛细管电泳-环煳精与芳香酸的作用4》.doc

实验七 基于环糊精与芳香羧酸相互作用的亲和毛细管电泳法研究 2010-11-13 第七组 王亚罗一 实验目的1 进一步理解毛细管电泳的基本原理； 2 熟悉毛细管电泳仪器的构成； 3 了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数4 通过毛细管电泳法研究环糊精与芳香羧酸的相互作用实验原理（14）式 三 仪器和试剂Agilent3D CE毛细管电泳仪μm，总长度48.5cm，有效长度40cm。 3容量瓶 50mL容量瓶个，分别标上mmol/L的β-CD缓冲溶液标签L的容量瓶1个，标有20 mmol/L的Na2HPO4缓冲溶液pH为L的容量瓶2个，分别标上4mmol/L和14mmol/L的β-CD缓冲溶液标签； 4 塑料样品管每组个分别用于标准样品、缓冲溶液、NaOH、水和废液，做好标号样：苯甲、苯酸、，均溶于0mmol/L的Na2HPO4缓冲溶液中作为标准品缓冲溶液(buffer)：0 mmol/L的Na2HPO4缓冲溶液，pH为β-CD溶液：4mmol/L和14 mmol/L（由Na2HPO4缓冲溶液 8 1mol/L NaOH溶液，次水镊子洗瓶耳球塑料样品管架废液烧杯个记号笔实验步骤仪器的预热和毛细管的冲洗：在实验教师的指导下，打开仪器和配套的工作站塑料样品管NaOH溶液的小瓶，2号位：放装有三次蒸馏水的小瓶，3-5号位：放装有Na2HPO4缓冲液μl混合标样0ul的丙酮作为示踪剂，7-8号位都为废液瓶位置。（注：每个小瓶中的溶液占整个小瓶的2/3.） 2）工作温度设置为0℃，不加电压，冲洗毛细管，顺序依次是：1 mol/L NaOH溶液5min，水min，Na2HPO缓冲溶液min，在运行电压下平衡10min。以后每次进样前均用对应缓冲液冲洗毛细管柱。 2．混合标样的配制：毛细管冲洗的同时，配制混合标样。定容，得到苯甲、苯酸、的混合溶液作为混合标样。β-CD与混合标样的测定： 待毛细管冲洗完毕，选择方法环糊精与不同酸的作用0mM”，鼠标左键单击操作界面左侧小瓶，选择“Sample Info…”在弹出对话框中填写以下信息： 操作者姓名——数据文件存储的子目录（以当天的日期命名，例——在“前缀”中以含不同浓度β-CD的Na2HPO4缓冲溶液进样压力0mbar，进样时间s，电压25kV，时间约10 min然后开始分析混合样品的测定完毕后，冲洗毛细管，顺序依次水min，然后更换缓冲溶液为 mmol/L β-CD的缓冲溶液，冲洗 min；环糊精与不同酸的作用mM”。 3）将缓冲液更换为含14mmol/L的β-CD的缓冲溶液，重复2）中的步骤，并选择“环糊精与不同酸的作用mM”。 4 毛细管的冲洗与保存： 完成实验以后，用水冲洗毛细管 min，清理实验台。数据处理根据电泳的原理，判断混合标样中个峰各自的归属origin画图软件将所导出的csv格式的数据进行作图 计算各个组分的有效淌度，并说明哪个组分可以作为电渗流标记物本次CE实验使用的毛细管总长度L＝cm，有效长度l＝40cm客体分子的电泳淌度浓度 t/min t/s μeff/cm2/Vs [β-CD]=0M tEOF t苯甲酸 t苯乙酸 t邻羟基苯甲酸 [β-CD]=0.004M tEOF 2.369 142.14 t苯甲酸 t苯乙酸 t邻羟基苯甲酸 [β-CD]=0.014M tEOF 2.452 147.12 t苯甲酸 t苯乙酸 t邻羟基苯甲酸 利用公式（14）以[β-CD]为横坐标、μeff为纵坐标，进行非线性拟合得到曲线图，求出β-CD相互作用的包结常数K。苯甲酸μA= -0.0003085 K= 37.09975 μ∞=-0.00009 X=[β-CD]/M 0 0.004 0.014 Y=μeff/cm2/Vs -0.0003085 -0.0002803 -0.0002339 苯酸μA= -0.0003361 K= 28.76368 μ∞= -0.00007 X=[β-CD]/M 0 0.004 0.014 Y=μeff/cm2/Vs -0.0003361 -0.0003090 -0.0002607 邻羟基苯甲酸μA=-0.0003597 K= 52.0621 μ∞=0.0000058233 X=[β-CD]/M 0 0.004 0.014 Y=μeff/cm2/Vs -0.0003597 -0.0002967 -0.0002056 μA=μeff ([β-CD]浓度为0时) 六 问题与讨论 1. 毛细管电泳仪的分离原理是什么？说明毛细管电泳法的特点及应用3. 简述β-环糊精与客体