DEPDC7基因在肝癌细胞中的表达及生物学作用.pdfVIP

DEPDC7 基因在肝癌细胞中的表达及其生物学作用 中文摘要 目的： 1.研究DEPDC7 基因在肝癌细胞中差异性表达及其蛋白在细胞内的定位。 2.探讨 DEPDC7 基因对肝癌细胞的增殖、凋亡和侵袭转移的影响。 方法： 1.常规培养正常肝细胞HL-7702 、肝癌细胞株HepG2 、SMMC7721、Huh-7 。 2.用 RT-PCR 方法检测 DEPDC7 基因 mRNA 在肝癌细胞的差异表达。以 GAPDH 为内参，1.2%琼脂糖凝胶电泳，用 GeneTool 软件进行半定量分析。 3.用 Western Blot 方法从蛋白质水平检测肝癌细胞的 DEPDC7 蛋白的表达， 用 GeneTool 软件进行半定量分析。 4.构建融合表达 DEPDC7 基因的 pEGFP-C1-DEPDC7 质粒载体。转染肝癌 HepG2 细胞、SMMC-7721 细胞，然后用 PI 染色在激光共聚焦显微镜下检测 DEPDC7 蛋白在细胞内的定位。 5.用MTT 检测转染pIRES2-EGFP-DEPDC7 质粒前后三株肝癌细胞的增殖情 况，绘制细胞生长曲线。 6.转染肝癌细胞非融合表达 DEPDC7 基因的 pIRES2-EGFP-DEPDC7 质粒， 流式细胞仪和 DNA ladder 方法检测 DEPDC7 基因表达上调后肝癌细胞的细胞增 殖率、凋亡。 7.转染肝癌细胞 pIRES2-EGFP-DEPDC7 质粒载体，通过细胞 Transwell 试验 研究 DEPDC7 基因对细胞的侵袭转移的影响。 8.RT-PCR 方法检测 DEPDC7 基因对侵袭相关基因表达的影响。 结果： 1.RT-PCR 半定量分析，DEPDC7 基因在肿瘤细胞的 mRNA 水平表达比正常 肝细胞中表达显著降低，三株肝癌细胞两两之间比较，差异有统计意义（P0.05 ）。 2.Western Blot 结果半定量分析，HL-7702 与三株肝癌细胞在蛋白质水平表 达差异有显著性（P0.05 ）。三株肝癌细胞两两之间的表达水平比较也有显著差 异，Huh-7 中蛋白表达最低，有统计意义（P0.05 ）。 3.转染 pEGFP-C1-DEPDC7 质粒载体的肝癌细胞 DEPDC7 蛋白主要定位于 4 细胞膜上，胞质内也可见。 4.生长曲线图显示，肝癌细胞生长较快，在 72h 内达到对数生长期，转染 pIRES -EGFP-DEPDC7 质粒后的肝癌细胞增殖较慢。 2 5.上调 DEPDC7 基因的表达，细胞增殖率受抑制，但未见有细胞凋亡现象。 6.上调 DEPDC7 基因的表达，对肿瘤的侵袭起抑制作用，并且能够使肿瘤 侵袭相关的基质金属蛋白酶类基因的表达量发生变化。 结论： 1.DEPDC7 基因在正常肝细胞中高表达，肝癌细胞中表达下调，其表达的蛋 白主要定位于细胞膜上，胞质内也可见。 2.上调 DEPDC7 基因表达后不引起细胞的凋亡，能抑制细胞增殖率和肝癌 细胞的侵袭转移，MMP-9 基因表达量降低，TIMP-1、TIMP-3 基因表达量增高。 关键词：基因芯片，生物信息学，肝细胞，肿瘤细胞，DEP 结构域 5 The research on the expression of DEPDC7 gene in hepatocarcinoma and of its biological effects Abstract Objective： 1．Research the variable expression of DEPDC7 gene in hepatoma carcinoma cells and the localization of DEPDC7 protein. 2 ．Investi