大果沙棘黄酮分离纯化及其生物活性的研究.pdf

摘要 舢『|『fff』『|『川㈣㈣|f『J『『|IJJⅢ删一 摘要 rhamnoides 大果沙棘(Hippophae 《J-IippoplaaeLinn．)。大果沙棘果中含有大量的生物活性物质，包括黄酮、多酚、胡萝卜 素、有机酸、脂类等，其主要活性成分沙棘黄酮具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、保肝、 抑菌、保护心血管系统等多项生理功能。 本文以大果沙棘果渣黄酮为研究对象，系统地研究了其分离提取工艺以及生物活 性。采用酶辅助法对大果沙棘果渣中的黄酮进行提取，确定了最佳提取工艺条件，获得 大果沙棘黄酮提取物。对大果沙棘黄酮的分离纯化进行研究，优化大孔吸附树脂吸附分 离大果沙棘黄酮的工艺条件。采用多种方法研究了大果沙棘黄酮的抗氧化活性，并对其 抗疲劳、降血脂和抗肿瘤活性及其相关作用机理进行研究。本研究的主要内容如下： 1、对大果沙棘果渣中化学成分进行分析，测定了其中的水分、灰分、总蛋白、粗 脂肪、多糖、黄酮、多酚等主要化学成分的含量。 2、采用酶辅助法对大果沙棘果渣中黄酮的提取工艺进行研究，利用单因素试验和 响应面试验优化大果沙棘黄酮的提取工艺，确定最佳提取工艺条件为：纤维素酶用量 20，乙醇体积分数71．4％，提取时间2h，大果沙棘果渣黄酮的得率为8．98mg／g。 3、对大果沙棘黄酮的分离纯化条件进行研究，考察了七种不同大孔树脂对大果沙 棘黄酮静态和动态吸附及解吸效果，X～5大孔吸附树脂对大果沙棘黄酮吸附分离效果最 好。并通过X一5大孔树脂柱研究了上样浓度、pH值、洗脱剂浓度、洗脱体积对黄酮回 收率的影响。X-5树脂柱吸附分离大果沙棘黄酮的最佳条件为：大果沙棘提取液上样浓 黄酮回收率为86．78％，纯度为54．1％。 4、系统地研究了大果沙棘粗提黄酮和纯化黄酮的体外抗氧化能力，考察了其总抗 儿茶素标准品进行对比，进而确定大果沙棘黄酮的抗氧化效果。 5、以昆明小鼠为实验动物，研究大果沙棘黄酮及其与西洋参、红景天、二十八烷 醇复合制剂的抗疲劳作用。通过小鼠爬杆实验和负重游泳实验，研究大果沙棘及其复合 制剂对小鼠的运动能力和运动后体内血乳酸、尿素氮、肝糖原和肌糖原含量的影响，研 究大果沙棘复合制剂对小鼠的抗疲劳作用。 6、研究了大果沙棘黄酮的体内降血脂功能。以Wistar大鼠为实验动物，建立大鼠 高血脂症模型，考察了大果沙棘黄酮对高血脂大鼠的血脂水平、脂代谢相关酶活性和抗 动脉硬化指数及体内抗氧化的影响，研究大果沙棘黄酮降血脂功能和抗动脉硬化作用。 人乳腺癌MCF．7三种肿瘤细胞株为研究对象。采用M丌比色法研究了不同浓度的大果 摘要 制作用，比较对三种肿瘤细胞抑制效果。 8、研究大果沙棘黄酮体外抗肿瘤作用机理。采用流式细胞仪检测大果沙棘黄酮对 Ladder检测对 HepG2肿瘤细胞周期变化和细胞凋亡情况；采用单细胞凝胶电泳和DNA 制。研究结果发现大果沙棘黄酮可抑制三种肿瘤细胞生长，促进细胞凋亡，降低癌细胞 Bax的表达和激活Caspase-3酶诱导肿瘤细胞凋亡有关。 关键词大果沙棘；果渣；黄酮；分离纯化；生物活性 Abstract Abstract rhamnoidesamemberofthe Seabuckthorn(Hippophaevat．sp)，is Elaeagnaceaefamily．It containsaseries ofchemical compounds，including totalflavones lipids，ascorbicacid，tannins are formostof