甘蓝型油菜及亲本物种MYB4基因家族的克隆和比较基因组学的研究.pdf

摘 要 甘蓝型油菜及其亲本物种MYB4基因家族的克 隆与比较基因组学研究 指导教师 柴友荣研究员、博士 遗传学专业硕士研究生尹锐 捅要 苯丙烷及其分支途径产生大量具有生物重要性的次生代谢物质。其中一条分支途径合成木质素， 对于高等植物的机械支撑、维管传导以及抗病性具有重要作用，另一条分支途径合成各种类黄酮物 质，它们除吸引传粉昆虫和保护植物不受紫外线伤害外，而且对人还具有抗炎、抗过敏和防癌的功 效。苯丙烷途径还参与合成芥子酸脂、香豆素、绿原酸、芪以及水杨酸等物质，作为植物的拮抗物 质或信号分子。因此，对苯丙烷代谢途径的操作一直是一个研究热点。AtMYIM是一个R21u-MYB 家族转录抑制冈子，它至少能抑制苯丙烷途径C4H基因的表达。在缺乏紫外线的条件下AtMYB4 能够负调节芥子酸脂的形成。因此，通过对转录因子MYB4进行遗传操作，能够深入植物次生代谢 调控机制的研究。 甘蓝型油菜(Brassica 作物或园艺作物，在它们中间有许多与苯丙烷途径相关的农艺性状长期是研究人员致力于遗传改良 的焦点．比如，经常发生的倒伏问题要求更加强壮的茎和分枝，抗病性的提高要求更快和更高水平 的受病原菌入侵而诱导的细胞壁木质化，而对木质素途径的流和强度以及不同木质素成份比例的遗 传改良是解决该问题的一个重要保障。近年来油菜尤其是甘蓝型油菜的黄籽性状由于其优质特性而 吸引了越来越多的研究人员，但是黄籽基因型的缺乏以及黄籽材料表现型的不稳定大大阻碍了黄籽 油菜的育种与应用，黄籽性状的形成的分子机制不清楚。黄籽性状的最典理特征是种皮木质素和种 皮色素的减少，业已证明种皮色素是原花青素的聚合物，原花青素是类黄酮途径的代谢产物，克隆 芸薹属MYB4基因并进行种皮特异性的表达有可能修饰油菜种皮色素和种皮木质素性状。在十字花 科，除了已经兜隆的拟南芥(Arabidopsis 基因被克隆，尽管该科中有许多重要的园艺和油料作物。本文报道了双二倍体物种甘蓝型油菜及其 二倍体亲本物种甘蓝和白菜中MYB4基因家族的克隆、分子分析和比较基因组学研究。 全长序列，并进行了系统分析，主要结果如下： 1)克隆了甘蓝型油菜及其2个亲本物种的MYB4基因家族 本研究利J}J RACE技术，获得了甘蓝型油菜及其亲本物种白菜型油菜和甘蓝的MYB4基因家族 两南人学6F!f。学化论文 1364和1405 bp，它们的mRNA分别为1271、1219和1253 和BrMYB4-2的mRNA分别为1280和1223 bp， 它们的mRNA分别为1278和1224 bp。BoMYB4-1 bp， 其mRNA为1275 bp。为深入研究芸薹属植物MYB4基因的功能、进化、调控模式奠定了基础。 2)芸薹属MYB4基因成员具有与AtMYB4相似的基因和蛋白特征 芸薹属9个MYB4基因都有1个内含子和2个外显子，符合GT．…”AG的内含子边雾序列特征， 8rIl彻彳．4、及琥Ⅸ静．J和反删啊射．2 85bp。 测它们均没有信号肽和跨膜域，它们可能定位于细胞核。 薹属3个物种的9个MYB4蛋白按同源性应属于拟南芥MYB超家家族的第四弧类，并且应该与 AtMYB4有类似功能，即以负调控因子的形式参与苯丙烷途径相关基因的调控。 它们的二级结构非常相似，以随机卷曲所占比例最高，占氨基酸总数的47．8556．80％；其次 是仪．螺旋，分别占氨基酸总数占25．17～32．67％，有少量的延伸链和p转角。它们蛋白的每个MYB 结构域中都有5～7个大的171一螺旋，C末端也有1个。它们的三级结构也很相似，都只预测出了N． 端的R2R3一MYB结构域的蛋白模型，而C．端尚没有匹配的模型。 从基因结构、蛋白结构、序列同源性三大方面分析，均显示芸薹属3个物种的9个MYB4基因 是AtMYB4的垂直同源基因。 3)白菜型油菜坩蓝与甘蓝型油菜间在基因水平的授受关系 码区序列的一致性高达100％。这些种间基因