肝豆状核变性、亨廷顿病和遗传性共济失调的分子诊断方法的研究.pdf

肝豆状核变性、亨廷顿病和遗传性共济失调的分子诊断方法研究 中文摘要 我们利用分子生物学技术，建立了肝豆状核变性、Huntington舞蹈病、遗传 性共济失调三种遗传病的分子诊断方法。 肝豆状核变性(hepatolenticular disease，WD)，是呈常染色体隐性遗传的铜代谢障碍病，以肝脏和神经系统病变 为特征。WD的致病基因称为WD基因，因其编码一种P型铜转运ATP酶 第二热点(T935M)突变。对无第一、二热点突变的，采用长链RT．PCR技术， 从外周血提取总RNA并合成cDNA，以cDNA为模板，分7个片段扩增致病基 因编码区，将纯化后的PCR产物直接测序，找出基因突变的位点。同时应用限 制性酶切分析(或基因组DNAPCR产物直接测序的方法)以证实所发现的突变。 结果显示：在14个家系中发现13个家系存在wD基因突变。其中4个家系的患 突变。另1个家系的患者未找到突变。 disease，HD)是一种呈常染色体显性遗传的中枢神经 亨廷顿病(Huntington 系统退行性病变，临床表现主要为进行性的运动障碍、精神异常和智能衰退。病 理表现为选择性的皮层、尾状核神经元变性，受累神经元的细胞内可见到包涵体。 其疾病基因一勰因编码一个功能未明的蛋白质一亨廷顿蛋白(huntingtin)。 位于肼瑾因第一外显子的第17位密码子CAG发生异常扩增，被认为是HD发病 的原因。本研究通过PCR扩增和DNA钡JJ序等方法，以福建地区一个亨廷顿病家系 2 12名家庭成员为研究对象，建立了针对中国人亨廷顿病的分子诊断方法。结果显 示12名成员中有6名觑盯基因CAG三核苷酸重复序列数目异常，重复数分别是45， 49，52，42，50，45。其中有3名尚未出现临床症状。 ataxia，HA)是一组以共济失调为主要临床表 遗传性共济失调(hereditary 现的神经系统遗传变性病。病变部位主要在脊髓、小脑、脑干，故也称脊髓．小 ataxia，SCA)。典型病例表 脑．脑干疾病，或称脊髓小脑共济失调(spinocerebellar 现为进行性步行困难，伴笨拙、语言障碍等。SCA的亚型众多，本研究通过聚合 酶链反应、琼脂糖凝胶电泳和直接测序的方法，建立了针对SCAl，2，3，6，7五种 发病率最高的亚型的分子诊断方法，并在4名患者中鉴定出1名SCA3亚型患者。 本研究在国际上首次建立了WD分子诊断方法体系，建立了对HD和SCA五种 常见亚型进行分子诊断的方法，为三种遗传病的临床诊断、产前诊断和遗传咨询 提供了可靠的科学依据。 关键词：肝豆状核变性；亨廷顿病；遗传性共济失调；脊髓小脑共济失调；基因 突变：分子诊断 3 Mdmdar methodsfor diagnostic Wilson disease disease，Huntington and ataxia spinocerebellar Abstract rnoloatl,T the establishedthermlenakT Using biologicaltechnology,we diagnostic methodsfor Wilson’S diseaseand ataxias． disease，Huntingtonspinocerebellar Wilson disease(WD)isallautosomalrecessivedisorde