发酵——发酵培养基.pptVIP

第四节、重组产品培养基的介绍 大肠杆菌高密度度培养： 碳源：葡萄糖、甘油 氮源：胰蛋白胨、酵母粉 无机盐：磷、镁等 蛋白胨、酵母粉(OXOID) 章越，生物工程学报，2004 动物细胞培养基 基础培养基: F12、DMEM等 血清(5-10%)：胎牛(FBS) 、小牛(CS) 、马(HS) 水：超纯水 其它：NaHCO3（CO2）、抗生素 GONG,J. B. B. 2003 本章小节： 培养基—菌体生长所需的营养以及其它必须的条件 了解发酵培养基的组成，发酵培养基常用的原料以 及其中的基本概念 发酵培养基的优化与设计是发酵工程的基本问题，掌握发酵培养基优化与设计的思路、了解其中的方法 前体指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接彼微生物在生物合成过程中合成到产物物分子中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。 2、前体 青霉素：分子量356 苯乙酸:分子量136 生物合成的前体物质 氨基酸 菌种 前体物质 产率（%） 丝氨酸 色氨酸 色氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 异亮氨酸 苏氨酸 嗜甘油棒状杆菌 异常汉孙酵母 麦角菌 脱氮极毛杆菌 粘质赛氏杆菌 阿氏棒状杆菌 谷氨酸小球菌 甘氨酸 氨茴酸 吲哚 硫代丁酸 α-氨基丁酸 D-苏氨酸 高丝氨酸 1.6 0.8 1.3 1.1 0.8 1.5 2.0 作用：前体有助于提高产量和组份 用量：前体的用量可以按分子量衡算，具体使用有个转化 率的问题 例：6000单位/ml的青霉素G,需要多少苯乙酸 青霉素＝6000*0.6（微克）＝36mg/ml 苯乙酸＝（36*136）/356=13.8mg/ml=1.38% 实际使用时的转化率在46-90%之间 例某厂单耗为：0.337（kg/10亿青霉素） 转化率为：0.6/(0.337*36/13.8)=68% 用法：前体使用时普遍采用流加的方法 前体一般都有毒性，浓度过大对菌体的生长不利 苯乙酸，一般基础料中仅仅添加0.07% 前体相对价格较高，添加过多，容易引起挥发和氧化， 流加也有利于提高前提的转化率 3、产物促进剂 所谓产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。 发酵过程的促进剂和抑制剂 抗生素 被抑制的产物 抑制剂 链霉素 去甲基链霉素 四环素 去甲基金霉素 头孢菌素C 利福霉素 甘露糖链霉素 链霉素 金霉素 金霉素 头孢霉素N 其他利福霉素 甘露聚糖 乙硫氨酸 溴化物、硫脲 硫胺化合物 L-蛋氨酸 巴比妥药物 促进剂提高产量的机制还不完全清楚，其原因是多方面的。 有些促进剂本身是酶的诱导物； 有些促进剂是表面活性剂，可改善细胞的透性，改善 细胞与氧的接触从而促进酶的分泌与生产， 也有人认为表面活性剂对酶的表面失活有保护作用； 有些促进剂的作用是沉淀或螯合有害的重金属离子。 抑制剂 加入后会抑制某些代谢途径的进行，使另一途径活跃，从而获得人们所需要的某种代谢产物，或使正常代谢的某一代谢中间物积累。用于甘油，抗生素工业 五、水 对于发酵工厂来说，恒定的水源是至关重要的，因为在不同水源中存在的各种因素对微生物发酵代谢影响甚大。 水源质量的主要考虑参数包括pH值、溶解氧、可溶性固体、污染程度以及矿物质组成和含量。 对于酿造行业，水的重要性不言而喻 对于常规发酵，可靠、持久，能提供大量成分一致清洁的水。 第三节 发酵培养基的设计和优化 目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合某一菌种的培养基配方，只能用生物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论，参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备，按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基。 一、培养基成分选择的原则 菌种的同化能力 代谢的阻遏和诱导 合适的C、N比 100∶0.2～2.0 pH的要求 （一）、理论转化率与实际转化率 理论转化率是指理想状态下根据微生物的代谢途径进行物料衡算，所得出的转化率的大小。 实际转化率是指实际发酵过程中转化率的大小 如何使实际转化率接近于理论转化是发酵控制的一个目标 二、成分含量的确定 例: 如在酒精生产中葡萄糖转化为酒精的理论转化率计算如下∶ 葡萄糖转化为酒精的代谢总反应衡算式为∶ C6H12O6 ─→ 2C2H5OH + 2CO2 葡萄糖转化