黄连、吴茱萸药对配伍机制及其药代动力学的研究.pdf

黄连、吴茱萸药对配伍机制及药代动力学研究 摘 要． 实验目的：药对是中药复方配伍中最简单、最基本的用药形式，药对配伍的研究是复 方配伍规律研究的基础和重要切入点0之一，本研究以经典的寒热配伍为主的黄连、吴 茱萸药对为研究对象，通过分析不同配伍比例药对中指标性成分的含量、药效作用和药 代动力学差异，探讨黄连、吴茱萸药对的配伍机制，为应用黄连、吴茱萸药对配伍的现 代制剂的物质基础研究，提供工作基础和理论依据。 实验结果： 1、从化学成分含量测定和药效作用两个方面，研究黄连、吴茱萸药对的提取方法和其 配伍比例。采用酸性染料比色法测定药对中总生物碱的含量，HPLC．UV法测定药对中 指标性成分的含量，以治疗胃溃疡为研究对象，建立了抗胃酸分泌实验和抗溃疡实验模 型，研究黄连、吴茱萸药对10个不同配伍比例(1：1～10-1)中化学成分含量和药效 作用差异，试验结果表明，黄连吴茱萸药对配伍比例6：l时，总生物碱含量最高，各指 标性成分含量最高，抗胃酸分泌实验和抗溃疡实验效果最好，综合分析，确定黄连、吴 茱萸药对的最佳配伍比例是6：1。采用HPLC梯度洗脱色谱法，建立了黄连、吴茱萸药 对不同配伍比例的色谱指纹图谱，确定18个共有峰，并对其中5个色谱峰进行了指认， 和黄连、吴茱萸单味药材相比较，不同配伍比例的HPLC色谱指纹图谱无新成分产生。 通过均匀设计试验和正交设计试验，以浸膏率、总生物碱含量、指标性成分含量评 价指标，确定黄连、吴茱萸最佳药对(配伍比例6：1)的最佳提取工艺是采用70％乙醇 为溶剂，每次8倍溶剂量，提取2次，每次2h；建立HPLC色谱法，梯度洗脱，同时 测定最佳药对中5种指标性成分的含量。 2、采用HPLC法测定血浆中盐酸小檗碱的含量。色谱柱：DiamonsilC。。(150minx4．6mm， 5H Il酌m，最低检测限是0．0021xg／ml。大鼠分别灌胃给药盐酸小檗碱单体、黄连提取物、 最佳药对提取物，三者所含盐酸小檗碱量相同，比较大鼠血浆中盐酸小檗碱的药代动力 学差异，三者的药时曲线通过房室模型和非房室模型分析，均为一房室模型。对药代动 力学数据采用spssll．0统计软件分析，结果显示，大鼠灌胃药对提取物后盐酸小檗碱的 鼠灌胃黄连提取物后盐酸小檗碱的Cmax，MAT与大鼠灌胃盐酸小檗碱单体的Cmax， MAT无显著差异。大鼠分别灌胃药对提取物、黄连提取物、盐酸小檗碱单体后盐酸小 檗碱的其他药代动力学参数无统计学意义。 3、采用HPLC法测定组织中盐酸小檗碱的含量，色谱柱：Diamonsil 烷基硫酸钠(SDS))，流速1．0 碱单体、黄连提取物、最佳药对提取物后0．5h，1．Oh，6．0h大鼠组织中盐酸小檗碱分布 的差异。数据结果采用spssll．0统计软件分析，结果表明：大鼠灌胃药对提取物后0．5h， 胃和脾组织中盐酸小檗碱的浓度与大鼠灌胃黄连提取物、盐酸小檗碱单体的盐酸小檗碱 浓度相比有差异；大鼠灌胃药对提取物后1．0h，肝、脾、肾组织中盐酸小檗碱的浓度与 大鼠灌胃黄连提取物、盐酸小檗碱单体后盐酸小檗碱浓度相比有差异；大鼠灌胃药对提 取物后6．Oh，肝、脾、肾、胰、小肠、睾丸组织中盐酸小檗碱的浓度与大鼠灌胃黄连提 取物、．盐酸小檗碱单体后盐酸小檗碱浓度相比有差异，其他组织分布三者之间无差异。 4、采用HPLC法测定尿样、粪样中盐酸小檗碱的含量，尿样、粪样色谱条件为色谱柱： Diamonsil 取物、药对提取物后，大鼠尿样、粪样中盐酸小檗碱的排泄差异。数据结果采用spssll．0 统计软件分析，结果表明：大鼠灌胃药对提取物与大鼠分别灌胃盐酸小檗碱单体、黄连 样排泄数据与大鼠灌胃盐酸小檗碱单体的尿样排泄数据在所有采集时间段内差异小。大 鼠分别灌胃药对提取物、黄连提取物、盐酸小檗碱单体的粪样排泄数据，三者之间有差 异。 5、采用LC．MSn测定尿样中代谢物成分和种类，比较分别给药盐酸小檗碱单体、黄连 提取物、药对提取物后，大鼠尿样中代谢产物的差异。结果表明：盐酸小檗碱单体灌胃 2 给药后的代谢物检测到小檗碱原型和5个代谢产物，其中一相代谢产物1个，二相代谢 产物4个。黄连提取物灌胃给药后的代谢物检NNd,檗碱原型和lO种代谢产物。其中 一相代谢产物1个，二相代谢产物9个。药对提取物灌胃给药后的代谢物检测到小檗碱 原型和10个代谢产物。与黄连提取物给药后的代谢产物比较，口服给药药对提取物后 的代谢产物在种类和数量上都无差异，只是代谢产物的量有所差异。采用H