鲤鱼中Sox9基因的克隆及其成体组织表达.pdf

摘要 ＆埔(SRY—relatedHMG_box)基因家族是在研究性别决定机制过程中发现的一类新的 编码转录因子的基因家族，其产物具有一个HMG基序保守区，参与诸如性别决定、骨组织 的发育、血细胞生成、神经系统的发育和晶状体的发育等多种早期胚胎发育过程，其中的 国J9基因是迄今为止该家族成员中研究最为深入的转录调控因子之一。在哺乳动物睾丸 支持细胞的分化途径中，-5撕9基因是跏最佳的下游调控基因，是除5≯r之外最重要 的雄性性别决定基因之一；同时也参与了软骨及其它组织和器官的发育过程。 鱼类属于低等的脊椎动物，性别决定方式较为原始，而鲤鱼则是我国重要的广布性经 济鱼种；并且踟工9基因不像册基因一样只存在于哺乳动物，而是存在于各种脊椎动 物之中，所以研究该基因不仅有助于揭示鱼类中性别决定及分化体系的运行机制，而且 有助于阐明脊椎动物的性别决定和分化体系的进化历程。 本实验首先根据公开发表的跏9基因HMG保守盒区序列资料，设计了…对兼并性 很高的引物，采用不规则跳跃降落PCR法对鲤鱼的基因组DNA进行了扩增，发现至少 存在三种形式的国z9基因。三者在保守盒区编码的氨基酸序列同源性非常高，并存在 异引物对鲤鱼脑组织中三种形式的勋J9基因进行了RT—PcR扩增，证实了三者内含子的 剪接位点。在这些研究的基础之上采用RACE技术分别克隆了鲤鱼胁劬基因的5’端和 7端非翻译区长927bp，开读框长1287bp，编码428 其中57端非翻译区长233bp，3 AY956415。将鲤鱼曲Ⅳ助基因与三刺鱼等九种动物的氨基酸序列相比较发现，它们的同源 性高达75％，这说明彩x9基因在长期进化中相当保守。应用半定量RT—PcR技术对鲤鱼 成体不同组织中勋劬基因的表达进行了分析，结果表明该基因表达广泛，尤以脑及精巢 中表达最为丰富。 关键词：鲤鱼sw9基因HMG保守盒RAcE成体组织表达RT-PCR Abstract arecha托lcterizedthe foundintIlesex-deteHnination by is research．Thcy The硝famiIyof廿anscription ofsuchdiVerse 0f arejnvolvedintlle processes presence“_HMGdomain，柚d regulation developmemal andleIls assex development earlyembryogenesis whichresearchis廿他 ofmeHlberinthef咖il fktoL one y，跏9is柚importaIltn锄scription development；as of isthebest the oftestisdi彘rcntiation most aIldextensivetodate．Inpath mammals，胁9 thorough