6重组体筛选和鉴定.ppt

第六章 重组体的筛选与鉴定 转化子：在DNA分子克隆中，通常将导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子； 重组子：含有重组DNA分子的转化子； 期望重组子（目的重组子）：含有外源目的基因的重组子。 *为什么要进行筛选和鉴定？ （1）不带任何外源DNA插入片段，仅由线形载体分子自身连接形成的环状分子； （2）由一个载体分子和数个外源DNA片段组成的重组分子； （3）单纯由数个外源DNA片段连接而成的多聚DNA分子； *鉴定的方法有哪些？ 载体表型选择法 根据插入序列的表型特征选择 DNA电泳检测法 核酸杂交检测法 免疫化学检测法 转译筛选法 第一节、载体表型选择法 根据载体所携带的标记基因的表型进行选择。 一、抗药性标记插入失活选择法 二、?-半乳糖苷酶显色反应选择法 一、抗药性标记插入失活选择法 插入效应:外源DNA片段与载体特定部位连接后，使载体的相关功能发生改变，为重组子的筛选提供信息。 插入失活 插入表达 抗药性插入失活指的是外源DNA插入载体的抗药性筛选标记中，导致该基因结构破坏而失活，使细胞丧失对抗生素抗性的功能。 在LacZ体系中，两个彼此互补的突变基因各自编码产生的多肽产物均无活性，但两个突变体间通过α肽互补作用可呈现有功能的β-半乳糖苷酶活性，进而可分解底物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）