三类新型集成化的基因芯片和其相关仪器的研制.pdf

变堡查兰堕主堂堡丝奎 玻片琼脂糖幕膜上固定了用于检测YMDD突变的分子信杯探针芯片的检测结果进行比较，得到了相 似的杂交检测信号。结果表明，这种新型的生物芯片可以满足临床检测的需求。 2． 管盖基因芯片及检测系统 为进一步简化上述基因扩增杂交检测一体化芯片的复杂性，我们提出了直接在Eppendorf管内 完成基因芯片的基因扩增杂交检测的新方案—管盖基因芯片技术。管盖基因芯片是一个基因扩增到 杂交检测的全封闭器件，基因探针同定在特制的基因扩增管的管盖内表面，并在这个封闭的体系中 加入了一个杂交液贮液池。研究结果表明．管盖基因芯片能够成功地在一个全封闭且无清洗的基因 芯片体系内实现多重基因扩增、芯片杂交及杂交信号的荧光检测过年旱，而且能够有效地避免了不同 样品『日J基凶扩增产物的无交叉污染。 我们设计和研制了相应的管蔫摹因芯片检测系统。检测系统包括荧光显微镜与CCD等硬件，以 及相关图像分析和数据处珲软件。该软什可对杂交结果进行图像捕获、贮存并进行图像分析、杂交 强度计算、检测结果标准化与数字化。 在管盖基因芯片研究的基础上，我们设计和研制了可同时检测SARS、副流感l、肠病毒、风 疹、副流感JIJ、流感B、麻疹、RSV、鼻病毒、流感A等10种病毒的管盖基因芯片，用丁，检测引 起流感类似症状的主要病原体，以期对于SARA．CoV感染与流感等具有相似的早期临床症状的病人 进行早期的鉴别。研制出可进行临床使用的检测试剂盒。在上述九种病原体的检测管盖基因芯片的 基础上，把实验结果重现性最稳定的五种病毒检测探针(SARS、副流感1、肠病毒、风疹、流感A) 制各检测试剂盒产品，其中一种风疹病毒探钊的作为内控阳性指标，用以监测检测过稃的有效性， 减少假阴性结果的产生。制定了检测试剂盒的企业标准、生产检定标准、试剂使用说明书。该产品 通过了国家乍物制品检定所的检定。 我们开展了用于单碱基错配检测的管盖基因芯片的研究。以HIV，1病毒的耐药基因突变作为检 测对象，我们存管盖基因芯片的基础上设计了一用于检测基因突变的管盖基因芯片。实现了HIV．1 测。 3． 定量基因芯片扫描系统及FRET定量检测基因芯片 基因芯片是一种高通量的基因检测技术，而定量PCR是一种基因定量检测技术，两者的有机结 合将可进行多基因的定量研究与应用。最近，我们实验室发展了一种基于I占|定Taqman探针技术的 定量基因芯片。在此基础上，本论文设计和研制了定量基因芯片检测系统，提出了一种多基因同时 定量检测的技术平台，可用于同一样品中不同基因的高通量定量检测。我们研制的基于基因芯片的 实时定量基因芯片扫描仪，包招硬件系统和软件系统。硬件系统有光学系统、基因芯片扫描平台和 信号采集、信号传递系统温控平台等5个部分组成。软件系统分为温度控制、图像定位、扫描控制、 光源控制、信弓处理、图像处理、结果计算7个子系统。该系统基本达到了基因芯片适时定量检测 的要求。为了验证定量基因芯片扫描系统，对固定FRET探针的FRET定量检测基因芯片进行了初 步的研究，为仪器的开发及改进提供枪测平台。 关键词：摹因芯片、管盖基凶芯片、基因定茸检测、基因突变、基因分型、仪器。 -V1． 摘要 英文摘要(Abstract) ofThreeNovel DNA andDetectionInstruments Title：DevelopmentIntegratedMicroarrays CandidatePh．D．：Liu Quan·Jun Lu Supervisor：ProfessorZu·Hung Nameofthe University：SoutheastUniversity The detection been inthefields method，has microarraytechnique，ahigh·throughput widelyapplied ofthe SNPstudie