SiRNA介导Survivin下调抑制膀胱癌细胞生长和侵袭能力研究.pdfVIP

SiRNA介导Survivin下调抑制膀胱癌细胞 生长和侵袭能力的研究 摘 要 第一部分 凋亡抑制基因Survivin在膀胱癌细胞系中的表达 目的测定凋亡抑制基因Survivin在3种膀胱癌细胞系中的表达，选择其中 Survivin表达较高的细胞系进入后续部分的实验。 养。通过半定量RT-PCR方法测定这3种细胞系SurvivinmRNA的表达水平；使 相比较，确定其表达相对量。 的SurvivinmRNA都有较高的表达，各种细胞系之间表达量差别不大。 SCaBER为5637表达量的55．8％。 SCaBER和5637细胞系均有Survivin mRNA的高表达；②T24和5637细胞系均 胱癌细胞系T24，SCaBER的肿瘤生物学特性，并为第二部分实验打下基础。 及其质粒载体的构建 序列，并构建其质粒载体。 因表达的siRNA。在找到有效抑制靶基因的siRNA以后，构建相应的质粒载体， 转染相应的肿瘤细胞，观察转染效率和对细胞的毒性。 mRNA基因 表达最低，干扰最有效，抑制率超过60％，统计学分析差异有显著性(PO．05)； 3号siRNA干扰SCaBER细胞48小时后SurvivinmRNA基因表达最低，干扰最 达的变化，干扰后48～96小时SuⅣivin蛋白的相对表达量最低，差异有显著性 silencerTM U6／Neo／GFP／NON silencerT”U6／Neo／GFP／RNAi及其阴性对照pGC RNAi，转染T24细胞成功，转染效率较高，质粒本身对细胞无毒无害。 之表达。③根据上述实验结果构建的质粒pCJC silencerTMu6／Neo／GFP，RNAiNON可用于T24细胞转染，转染效率较高， pGC 质粒本身对细胞无毒无害。 第三部分靶向抑制T24膀胱癌细胞系Survivin表达对其生长 和侵袭能力的影响 目的 侵袭能力的影响，并探讨其相关机制。 方法将T24分为干扰组、对照组、空白组和荧光组：干扰组加入已经筛 白组不予任何处理；荧光组加入FITC标记的阴性对照siRNA。观察转染效率。 凋亡染色和流式细胞仪检测细胞凋亡，观察细胞周期分布变化；③细胞划痕实验、 Transwell侵袭实验观察细胞运动和侵袭能力变化。 结果①MTT的结果显示，T24细胞在转染后72小时后即出现生长能力的 下降，至第6天，细胞活力下降40～50％，差异有显著性(P0．05)，证明针 可以明显的观察到干扰组细胞发生凋亡的比率要明显高于对照组和空白组，差异 有显著性(PO．05)，但凋亡比率30％。流式细胞仪也同样检测到干扰组T24 细胞Gl峰前典型的凋亡亚二倍体峰，证明存在明确的凋亡。但是流式细胞检测 的结果只显示了G2期细胞稍下降，却并没能提示明显的GdM期阻滞现象。③ 划痕实验结果表明，划痕后24h、48h、72h，干扰组划痕间距明显大于对照组和 空白组，所有差异都有显著性(P0．05)，表明干扰后T24细胞的运动能力明显 下降；Transwell侵袭实验结果干扰后72h，干扰组穿膜细胞数明显低于对照组和 空白组，差异有显著性(P0．05)，表明干扰后T24细胞侵袭能力明显下降。 结论 的变化；③Survivin—siRNA可以明显抑制T24膀胱癌细胞的运动和侵袭能力。 关键词：小干扰IⅢA；Survivim膀胱肿瘤；凋亡；质粒载体 SiRNA--mediated ofSurvivininhibits down--regulation bladdercancercell andinvasion growth ABSTRACT PartI ofSurvivinin