GUDCA对胆红素所致SD大鼠脑干神经元突触小体Ca2过载的拮抗作用.pdfVIP

GUDCA SD Ca2+ 对胆红素所致 大鼠脑干神经元突触小体 过载的拮抗作用 中文摘要 GUDCA对胆红素所致SD大鼠脑干神经元突触 2+ 小体Ca 过载的拮抗作用 中文摘要 SD 目的探讨胆红素对 大鼠脑干神经元突触小体游离钙离子浓度的影响，以及甘 氨酸熊脱氧胆酸（GUDCA）的拮抗作用。 方法采用出生后7-14天的SD大鼠40只（雌雄不拘），随机分成三大组，分别为 对照组（A组），胆红素组（B组，胆红素浓度分别为0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L）， 以及GUDCA干预组 （C组胆红素浓度同B组，GUDCA50μmol/L）。SD大鼠称重并 4.5mg/kg 0.32 麻醉（乙酰丙嗪，肌注， ）、迅速断头、取脑干，用蔗糖密度梯度离心法（ 2+ 2+ mol/L、0.8mol/L、1.2mol/L）提纯脑干突触小体；以不含Ca 、Mg 、酚酞的HBSS 分别洗涤、离心三次后，用钙离子荧光探针Oregongreen488BAPTA-1/AM10μmol/L 染色，室温下孵育40min，再以HBSS分别洗涤、离心三次，再次离心，加适量HBSS BCA 获得富有活性的突触小体悬浮液 （ 法控制蛋白浓度）。采用光镜及透射电镜观察 突触小体活性，并以共聚焦激光扫描显微镜观察不同条件下突触小体的形态，以及突 2+ 触小体[Ca ]i荧光强度的实时变化。 结果通过上述方法可以获得活性良好的SD大鼠脑干神经元突触小体；对照组突 2+ 触小体[Ca ]i 的荧光强度稍微增加；在0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L 的胆红素的 作用下，胞内钙的荧光强度迅速升高，并随浓度增加而增加；在胆红素和GUDCA 的 共同作用下，胞内钙荧光强度显著降低。 结论胆红素能使突触小体内的钙超载，并与浓度呈正相关；GUDCA能够显著抑 制胆红素所致的突触小体内的钙超载。GUDCA是有效的、潜在的治疗新生儿胆红素 脑病的治疗药物。 GUDCA OG-BAPTA 关键词胆红素；突触小体；内钙； ； ；共聚焦激光扫描显 微镜 者：李丹萍 指导老师：时海波 I GUDCA SD Ca2+ 英文摘要 对胆红素所致 大鼠脑干神经元突触小体 过载的拮抗作用 GUDCAinhibitsbilirubin-inducedcalciumoverloadin synaptosomesisolatedfrombrainstemneuronsintheSD rats Abstract Purpose Toobservereal-time changesofintracellula calciumarosefrombilirubin andGUDCAinsy