类胰蛋白酶和类糜蛋白酶表达在过敏性反应死亡和冠心病猝死中的法医学意义.pdfVIP

ll II IIII I L UI IIIII I Ii l Y2257084 类胰蛋白酶和类糜蛋白酶表达在过敏反应 死亡与冠心病猝死中的法医学意义 硕士研究生：付立平 指导教师：王慧君教授 摘 要 研究背景 过敏性反应是典型的I型超敏反应，是超敏反应中发病最急、病情最危重的 疾病。虽然过敏性疾病一直是临床医学研究的热点，国内外学者就其发病机制、 临床诊断和临床治疗做了大量研究。但在法医学实践中，过敏性反应死亡尸体 常无特异性病理学改变，诊断往往根据过敏史、临床表现及非特异性形态学改 变等(如肺水肿、多器官淤血、嗜酸性粒细胞浸润)，且排除损伤、窒息和中毒等 其他因素后才能得出结论，因此给法医学死因鉴定带来很大困难。而且在法医 学鉴定中因其他原因猝死者(如冠心病猝死)，在不典型的情况下，也常常被怀 疑为过敏性反应死亡。 肥大细胞是人类速发型过敏反应的起始细胞，肥大细胞激活后可释放出大 量的促炎症介质，如类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、糖蛋白、组胺、十二烷类以及 细胞因子等，类胰蛋白酶(trypase)是一种中性丝氨酸蛋白酶，是储存在肥大细 胞颗粒中最丰富的一种介质，占肥大细胞总蛋白的20％，几乎只由组织肥大细 胞释放。而类糜蛋白酶(chymase)是肥大细胞分泌的另一种蛋白酶，占肥大细胞 总蛋白的3％，在过敏、缺血、损伤等情况下经脱颗形成分泌到细胞外基质中。 近年来研究表明类胰蛋白酶和类糜蛋白酶分子量大于其他致过敏性反应的介 质，且其理化性质稳定，因此，类胰蛋白酶和类糜蛋白酶被认为是肥大细胞脱 颗粒的重要标志，也是法医鉴定过敏死的相对可靠指标。然而，类胰蛋白酶增 高并不一定仅出现在过敏反应中，据国外文献报道，一例非过敏死亡的病人， 1 摘要 其血中类胰蛋白酶高达106ng／mL。近年来有学者发现，动脉粥样硬化、注射海 洛因死亡、创伤导致死亡、婴幼儿猝死综合征尸体心血中类胰蛋白酶也有不同 程度的升高。最近研究发现，肥大细胞不仅参与过敏反应，而且在起始免疫和 免疫调节方面也发挥着重要的作用。在心血管疾病患者中，肥大细胞可诱导心 肌细胞凋亡及成纤维细胞、血管内皮细胞等非心肌细胞增殖，能强有效的促进 血管新生，在心血管疾病中发挥着重要的作用。冠心病猝死发生迅速，尸体常 无特异性病理学改变，组织、血清中也有较多类胰蛋白酶表达，这些使得对类 胰蛋白酶等参与过敏死的判断变得更为复杂，调查非过敏死者的肥大细胞反应， 便成为鉴定过敏死或排除其它死因的重要鉴别手段。 目的 目前关于冠心病和过敏反应死亡死者心脏、肺脏肥大细胞及血清类胰蛋白 酶含量的比较研究，国内外均罕见报道。为此，我们应用免疫组化和图像分析 技术来定性和半定量检测类胰蛋白酶和类糜蛋白酶在过敏反应死亡和冠心病猝 死心肺组织中的表达变化，分析尸体心血类胰蛋白酶含量以探讨类胰蛋白酶、 类糜蛋白酶在过敏反应死亡中的意义及其与过敏反应死亡和冠心病猝死的关 系，为过敏反应死亡的病理诊断和法医学鉴定提供科学依据。 材料和方法 1．嗜酸粒细胞半定量结果的判断 据200倍物镜下嗜酸粒细胞的个数，对来自12例过敏性反应死亡样本的 喉头、肺和肠组织过敏反应程度进行半定量判定：阴性(无嗜酸粒细胞)或弱 阳性(+，嗜酸粒细胞20个)判断为低致敏反应程度；中等强度阳性(++，20 个≤嗜酸粒细胞40个)或者强阳性(+++，嗜酸粒细胞／40)判断为高致敏反 应程度。 2．类胰蛋白酶和类糜蛋白酶各组心和肺组织中的定量表达特点 用免疫组织化学SP方法检测类胰蛋白酶和类糜蛋白酶在12例过敏性反应 死亡、20例冠心病猝死、20例有冠脉粥样硬化但死因为非心脏性疾病和20例 无明显冠脉粥样硬化且死因为非心脏性疾病死亡心和肺组织中的表达，用 Ⅱ 硕士学位论文 Image-proplus图像分析技术测试类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的光密度值(Optical density，OD)，分析不同死