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内源性肾上腺糖皮质激素对血管炎症反应抑制作用的研究 内源性肾上腺糖皮质激素对血管炎症反应抑制作用的研究 硕士学位申请人：黄樾 导 师：罗健东教授 中文摘要 目的： 糖尿病是以血糖持续性升高为特征并常伴心血管并发症的代谢性疾病。血 管内皮细胞损伤是糖尿病导致心血管疾病如动脉粥样硬化等的起始环节。氧化 应激和炎症反应已被确认是血管内皮细胞损伤的重要机制。已有研究表明生理 水平的肾上腺糖皮质激素具有抗炎作用。其抗炎作用主要是通过增强核组蛋白 去乙酰化酶(HDAC)的活性，从而抑制促炎核因子AP-I和NF-KB的转录来实 现的。最近的研究资料显示氧化应激使肺组织HDAC失活，取消了外源性肾上 腺糖皮质激素的抗炎效应。这些结果提示氧化应激灭活HDAC，不仅能够取消外 源性肾上腺糖皮质激素的抗炎作用，也可能削弱内源性肾上腺糖皮质激素的抗 炎效应。因此，这里将主要研究生理水平肾上腺糖皮质激素对血管炎症反应的 抑制作用(抗炎作用)；这种内源性抗炎机制在糖尿病血管并发症中的作用和 意义；以及氧化应激导致内源性抗炎机制受损的分子机制。 方法： 抗剂)、TSA(HDAC抑制剂)和摘除双侧肾上腺处理后，腹腔注射LPS，取大 鼠胸主动脉提取组织蛋白，ELISA法检测细胞因子IL-1B、IL一6、IL-IO含 量、NF-KB以及HDAC活性。 2．选用6—8周龄雄性C57／B6小鼠，腹腔注射佐链脲菌素(STZ)，建立1型糖 尿病小鼠模型。将糖尿病小鼠分为单纯糖尿病组及抗氧化剂组，单纯糖尿病 3 ． 内源性肾上腺糖皮质激素对血管炎症反应抑制作用的研究 测肾上腺糖皮质激素含量，流式细胞仪检测细胞因子IL-6、IFN-Y、TNF- Q、MCP一1含量，ELISA法检测NF-KB以及HDAC活性。 3．分别使用糖尿病8周小鼠，同龄正常对照组；糖尿病12周小鼠，同龄正常 尿病小鼠，糖尿病10周小鼠，取血管组织进行石蜡切片和HE染色，观察各 组小鼠血管形态学变化。 4．原代培养小鼠胸主动脉内皮细胞，经形态学和免疫组化鉴定后，用3—5代进 行实验。分别给予LPS(内毒素)、氢化可的松、TSA等处理，取细胞上清液， EILSA法检测细胞因子IL-IB、IL一6、IL-10含量、NF—KB以及HDAC活性。 结果： 1．经LPS刺激的SD大鼠，其胸主动脉内IL-113、IL-6和IL-lO的含量以及 NF-K B的活性均比正常对照组显著升高(PO．05)；分别给予RU486、TSA 以及摘除双侧肾上腺处理再腹腔注射LPS，可见IL-1B、IL-6和IL-IO的 含量以及NF—KB的活性均比单纯给予LPS显著升高(PO．05)。预先给予 RU486或者摘除双侧肾上腺处理对SD大鼠胸主动脉组织中HDAC活性未见明 显影响(P0．05)；而预先给予TSA后，大鼠胸主动脉中HDAC活性受到抑制 (PO．05)。 2．糖尿病小鼠分别于2、4、8、12周处理，与正常对照组相比，血清肾上腺糖 时间递增的趋势(PO．05)；胸主动脉NF-KB活性显著升高(PO．05)，HDAC 活性下降(P0．05)，但未表现出明显的时间依赖性(P0．05)。 周处理，与正常对照组相比，各抗氧化剂对不同细胞因子表现出不同作用： 降(P0．05)，但死亡率很高，存活例数不足。各抗氧化剂均能引起胸主动 脉NF-KB的活性不同程度降低(P0．05)，而胸主动脉HDAC活性不同程度 4 内源性肾上腺糖皮质激素对血管炎症反应抑制作用的研究 的升高(PO．05)。 结论： 1．分别阻断糖皮质激素受体、抑制HDAC活性和摘除双侧肾上腺，均可见SD 大鼠胸主动脉内细胞因子IL-IB、IL一6、IL-IO的含量以及促炎转录因子 NF-K B的活性均明显增加，提示内源性的肾上腺糖皮质激素对血管炎症反 应具有抑制作用。 2．糖尿病小鼠血清肾上腺糖皮质激素水平、细胞因子如IL一6、IFN—Y、TNF- Q等水平以及胸主