mTOR%2fp-%2770-S6激酶信号途径在CHL细胞蛋白质合成中及其心肌细胞肥大中的作用的研究.pdf

中文摘要 前 言 细胞生长是生物大分子合成，导致细胞体积或质量增加。细胞生长不 是简单的质量增加，而是发生在特定的时间和地点的受到精细调控的过程， 并且与细胞增殖、凋亡相互协调才能长成适宜的细胞、器官或个体。近年来 of 研究表明，雷帕霉素靶(mammaliantarget 生长的信号转导过程中具有十分重要的作用，是细胞生长的中心调控因子。 kina- kinase—related mTOR属于磷酯酰肌醇激酶相关激酶(phosphoinositide 调控因子。 蛋白质合成在细胞生长中起重要作用，它受许多刺激因素的调控，包括 胰岛素和佛波酯。以往有关调控蛋白质合成的信号途径的研究多集中于胰 研究表明，胰岛素通过PDK、roTOR依赖性途径促进蛋白质合成。佛波酯 12一myristate (phorbol 合成，然而其信号传递途径及其与P13K、mTOR之间的关系目前尚不清楚。 环内酯物，当它进人细胞发挥作用时，首先与其细胞内受体FKS06结合蛋 of mTOR(mammalian target hamster 素处理血清饥饿的中国仓鼠肺成纤维细胞(Chinese cells， lung 白质合成中的信号传递及其与PDK、mTOR之间的关系，为进一步研究蛋 白质合成、细胞生长、增殖等领域提供理论依据。 心肌肥厚与各种心脏事件的发生密切相关，是独立的心血管病危险因 素，然而其确切机制尚不清楚。目前研究认为，各种生长因子、神经递质、机 械应力等刺激，通过激活细胞内信号传递途径引起的蛋白质合成增加、细胞 过度生长，是高血压病发生心肌细胞肥大、心肌肥厚的主要机制。心肌肥厚 的细胞学特征主要表现为：细胞体积增加、蛋白质合成增加。Rapamycin通 究表明，Raparnyein抑制血管紧张紊Ⅱ、苯肾上腺紊、异丙肾上腺素、缓激肽 等诱导的胎鼠心肌细胞的肥大、P加S6K的活化及蛋白质的合成等。roTOR 是细胞生长的中心调控因子，p70S6K是调控蛋白质合成的关键信号分子。 因此mTOR／p”S6K信号途径可能在心肌细胞肥大、心肌肥厚的发生中起重 要的调控作用。另外，饥饿培养的新生大鼠的心室肌细胞处于终末分化状 态，而不重新进入细胞周期。在生长因子的刺激作用下，这些细胞只发生肥 大反应而不发生细胞分裂，从而避免受到细胞周期进程的复杂影响。因此 新生大鼠心室肌细胞是研究细胞生长的理想模型。 为此我们原代培养新生大鼠的心室肌细胞，应用rapamyein预处理、 20％胎牛血清处理血清饥饿的心肌细胞，观察心肌细胞表面积、蛋白质含量 及p70S6K的活性改变。同时选用自发性高血压大鼠(spontaneous hyporten． sire rat，SHR)为实验对象，研究心肌肥厚时，形态学和血液动力学参数改 激酶信号通路在心肌细胞生长、心肌肥厚中的作用和机制。 方 法 1．细胞培养及细胞周期同步化 (1)中国苍鼠肺成纤维细胞系(CHL)由中国医科大学遗传教研室提 modified 供，用DMEM(dulbeccog Eagles 活的胎牛血清，滤膜除菌。将5×105细胞接种于250ml培养瓶中，隔天换 液。细胞长满至70％时改用不加胎牛血清的DMEM，饥饿培养18h，此时细 胞同步于c0／g。期。