PRRSV+NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制及其冰冻切片免疫荧光技术快速检测PRRSV抗原.pdfVIP

PRRSV NVDC—JXAl株膜基质蛋白单克隆抗体的研制及冰冻 切片免疫荧光技术快速检测PRRSV抗原 摘要 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪 繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。近几年来我国大部分地区夏秋季出现 猪的高热病，我国农业部2007年确定引起高热病的主要病原是猪繁殖与呼吸综合 征病毒变异株。目前，该病已是危害我国养猪业最严重的病毒性疫病之一。 周龄BALB／C小鼠。应用淋巴细胞杂交瘤技术，最后一次免疫后第三天取其脾细胞 与SP2／0细胞在聚乙二醇作用下融合，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免 疫荧光试验(IFA)筛选，得到2株稳定分泌抗PRRSVNVDC-JXAl株特异性抗体 株单克隆抗体与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪乙脑病毒 无交叉反应，与PRRSV 示，该两株单抗是针对PRRSVNVDC．JXAl膜基质蛋白的特异性McAb。 利用前期获得的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体1D12作为一抗， 建立了在冰冻切片中快速检测PRRSV抗原的免疫荧光(IFA)方法。运用该方法检测 猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪乙脑病毒感染发病猪组织无 特异性免疫荧光信号，而检测PRRSV 接种后14d即可在肺脏、NI-J淋巴结、脾脏、扁桃体、肾脏、大脑等组织脏器中检测 到特异性免疫荧光信号；检测临床可疑病例的PRRSV的阳性率(62．5％)比病毒分离率 (31．25％)高，并且符合率达100％。结果表明，该方法具有快速、敏感、特异、直观的 特点，可用于PRRSV感染的实验室快速诊断。 关键词：PRRSV，膜基质蛋白，单克隆抗体，免疫荧光试验，冰冻切片 ofmonoclonalantibodiesmatrix of Development againstprotein PRRSVNVDC—JXAlstrainand of PRRSV antigens quickly detectedinfroze sectionan histologicalby assay Abstract Porcine and virus(PRRSV)wasthecausative reproductiverespiratorysyndrome of caused failureinSOWSand in agentPRRS，which reproductive respiratoryproblems farmsin recent，some Chinaoccurredswine feverinsummer．In piglets．．In pig high 2007，Chinese announcethatPRRSVwasthemain in AgricultureDepartment high angen fever．At hasbeenoneofmostseriousvirulent diseases present，It epidemic which．harm our co