苯甲酰脲衍生物F13的抗肿瘤作用及其机制的研究.pdf

中文摘要 苯甲酰脲衍生物F13的抗肿瘤作用及机制研究 F13(3．溴代乙酰胺．4．甲氧基．苯甲酰脲)是本所合成室宋丹青教授课题组合成 的一个小分子化合物。其母体化合物及其它衍生物可抑制p．微管蛋白聚合，阻断肿 瘤细胞周期于M期，进而诱导凋亡。以前的研究结果表明，F13不引起肿瘤细胞周 期阻滞，丧失了先导化合物的抗微管微丝作用，但仍具有相似的抗肿瘤作用。本研 究主要目的是探讨F13潜在的抗肿瘤作用及机制。研究结果如下： 1．初步探讨F13的抗肿瘤作用 首先我们检测了F13对多种肿瘤细胞系的体外生长抑制作用，包括人纤维肉瘤 细胞，人乳腺癌细胞，多药耐药的人乳腺癌细胞MCF7／DOX，人结肠癌细胞，人非 小细胞肺癌细胞，人肝癌细胞，以及人正常肝细胞L02。F13在所试验肿瘤细胞系 中的IC50值范围为1．11到4．52 lag／m1)。具有高转移能力的人纤维肉瘤细胞系HT．1080的IC50值为2．52lag／ml。 接着，我们在昆明小鼠中检测了F13对H22移植瘤的体内生长抑制作用。结果 表明，40 mg／kg 为30．4％，10 mg／kg以及20mg／kg的F13对H22移植瘤的生长没有明显的抑制作 用。 最后，我们采用基因芯片的方法检测了F13对细胞基因水平的影响。结果显示， 2．5gg／ml 的基因参与包括细胞骨架调节、凝着斑、MAPK、细胞外基质．受体相互作用、细胞 粘附分子、Wnt、I]-TGF、粘附连接等细胞调节通路，这些通路与细胞的运动、粘 附以及增殖密切相关，由此，我们提出假设：F13可能影响细胞的运动、转移能力。 因此，我们在下一步实验中选择一株具有高转移能力的细胞系HT．1080用于探讨 F13对其运动、侵袭、以及粘附能力的影响。 2．F13对人纤维肉瘤HT．1080细胞的抗肿瘤作用 基于实验室以前的结果，我们再次检测了F13对HT．1080细胞周期的影响。流 式细胞仪检测结果表明F13没有引起细胞周期分布的明显变化，与实验室以前的结 果一致，证实F13的抗肿瘤作用不依赖于周期阻滞。 在实验过程中，我们发现高浓度F13(≥5 h即可引起HT．1080 pg／m1)在给药后2 h也可引起部分细胞发生类似的形态 细胞皱缩，变圆。2．5“g／ml的F13在给药后4 学变化。而l h，4h，6 短时间处理(如2 h，8h，或24h)后撤药，换成新鲜培养基继续培养至 24h，48h，或72 h，其生长抑制率与持续给药组细胞没有显著差异。说明F13对 HT．1080细胞具有快速而不可逆转的杀伤作用。 文献报道指出，细胞内钙离子过载或细胞内外钙离子平衡被打破时，可导致细 胞毒作用，并诱发细胞凋亡或坏死。因此，我们也检测了F13对HT．1080细胞内钙 离子浓度的影响。流式细胞仪结果显示，高浓度F13(5 lag／ml，10I．tg／m1)在给药 后1h即可引起细胞内钙离子浓度的增加。2．5 F13在给药后4h后也引起细 I．tg／ml 胞内钙离子浓度升高。而在整个过程中，l F13处理的细胞，其细胞钙离子浓 ptg／ml 度与对照组细胞相比，没有发生明显的变化。F13引起HT．1080细胞内钙离子浓度 随时间的变化趋势与我们先前观察到的细胞形态变化趋势一致，表明，F13引起的 HT．1080细胞杀伤作用可能与细胞内钙离子浓度的改变有关。 的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。浓度为2．5～5¨g／ml的F13可显著抑制细 胞的生长，而浓度为0．5～1 Itg／ml的F13在第6天以前，对细胞的生长不存在显著 性影响，该结果提示，小于1“g／ml的浓度可能是一个亚毒性剂量，该浓度范围被 我们在后续实验中用于研究F13对细