Pim-3基因对暴发性肝衰竭的肝保护效应的研究.pdf

摘要 摘要 暴发性肝衰竭(FHF)是一死亡率极高，以大量肝细胞凋亡、严重肝损害为 特征的临床疾病。丝／苏氨酸激酶Pim．3基因具有显著的肝细胞凋亡抑制和生长 促进效应，预期能在FHF的疾病治疗中发挥积极作用。为此，本课题进行了Pim．3 基因转染动物活体肝组织的实验，目的是探讨Pim．3基因对FHF的组织修复或 肝保护效应及其作用机制。课题研究采取了多步骤分阶段的方式进行。首先， 采用RT-PCR的方法，从大鼠心肌组织中分离并克隆了Pim．3基因。通过基因重 组技术，完成了Pim-3基因质粒载体的构建，并利用基因转染技术顺利地实现了 重组体质粒pEGFP-N2／Pim-3在体外真核细胞的表达和活性测定；其次，采用常 规和流体力学方法进行GFP表达质粒溶液的鼠尾静脉注射，证明常规注射和流 体力学注射是两种不同的活体基因转染方法，具有不同的器官靶向性和基因转 染效率。其中流体力学方法是一个高效的肝靶向性动物活体基因转染方法；再 次，采用腹腔注射LPS／D．GaIN的方法建立FHF大鼠模型。找到了制备动物模 型最佳的药物剂量，证明小剂量LPS可诱导D．GaIN致敏大鼠产生显著但非致死 性的急性肝衰竭。其中，肝细胞凋亡是LPS／D