C_酶的催化活性和调节机制_2.ppt

酶的催化活性和调节机制(2) 3.6 酶促反应动力学 3.6.1 酶与底物之间的作用 酶的中间产物理论 酶分子（E）表面与底物（S）结合形成不稳定中间产物即酶-底物复合物（ES），它较底物需要较少的活化能就可继续反应，分解成产物（P）并释放酶。因此，ES 浓度决定着整个酶促反应速度。 3.6.1 酶与底物之间的作用 米氏方程 当 Km= [S] 时，则 v = 1/2 Vmax ，即当酶促反应速度达到其最大反应速度的一半时，Km值即为此时的底物浓度，其单位是 mol/L。 当 Km远大于 [S] 时，分母[S]不计，则v = Vmax [S]/Km，初速度与底物浓度呈一级反应。 当 Km远小于 [S] 时， Km不计，则v = Vmax，初速度与底物浓度呈零级反应。 3.6.1 酶与底物之间的作用 3.6.1 酶与底物之间的作用 米氏常数（Km）的特性 Km与酶的性质有关，与酶浓度无关； Km最小的底物为该酶的最适底物； Km值与温度、pH等环境因素相关； 1/Km近似表示对底物亲和性大小； K3＜＜K1和K2时，Km≈Ks Km随不同底物而异（酶专一性判断指标） 米氏方程求解方法 Lineweaver-Burk法 (双倒数法） 横轴截距为-1/Km，纵轴截距 1/Vmax，斜率Km/ Vmax。 缺点：点过分集中在直线左下 方，而低浓度S点因倒数后误 差较大，偏离直线，影响结果。 米氏方程求解方法 Hanes-Woolf法 横轴截距为-Km，纵轴截 距Km /Vmax，斜率1/ Vmax。 米氏方程求解方法 Woolf-Hofstee法 3.6.2 单底物较复杂的酶反应 多种活性中间产物 底物的抑制：酶分子上有两个底物结合位点，一为高亲和性，另一个为低亲和性。当其完全被底物占据时会抑制高亲和性位点的结合作用，使酶促反应速度降低，如果糖二磷酸酶。 多个活性部位：有多个亚基、多个活性中心，其动力学实验常很复杂，不符合米氏方程。 3.6.3 pH影响下酶促反应动力学 3.6.4 酶的抑制动力学 （1）不可逆抑制：抑制剂与酶分子中的必要基团发生共价结合，使酶失活。 按其选择性差异，不可逆抑制剂分： 专一性：仅与活性部位有关的基团反应； 非专一性：可与几类基团反应。如有机磷、砷、重金属（Ag、Pb、Hg）、氰化物 (沙林毒气）、CO及青霉素等。 3.6.4 酶的抑制动力学 （2）可逆抑制： 竞争性抑制： 3.6.4 酶的抑制动力学 （2）可逆抑制： 非竞争性抑制： 3.6.4 酶的抑制动力学 （2）可逆抑制： 反竞争性抑制： 3.6.5 双底物酶促反应动力学 顺序有序反应 (如NAD+或NADP+的脱氢酶) A B P Q E E EA EAB EPQ EQ 顺序随机反应 (如肌酸激酶使肌酸磷酸化反应) 乒乓反应或双-置换反应 (如氨基酸转移酶) A P B Q E E EA FP F FB EQ 四、酶的调节作用 生命现象调节和控制层次： 整体水平调控：神经系统和激素； 器官、组织和细胞水平调控：体液； 分子水平调控：酶为中心的调控。 酶分子的调控方式：环境因素调控、别构调控、共价调控、酶原激活调控、分子聚合调控。 4.1 酶自身活性的调控 4.1.1 环境因素调控 环境因素改变使酶构象稳定的力的平衡; 环境因素的种类：pH 、温度、金属离子、有机溶剂等； 例如溶菌酶：在细胞内合成后即具有完整的空间结构，但细胞内pH值约为中性，酶的活力很低，当溶菌酶分泌到细胞外偏酸性环境中pH 5时，溶菌酶