肿瘤标志物核酸适体的筛选和其应用.pdf

摘要 2．SRC．3核酸适体的筛选及应用 coactivator SRC．3(Steroidrec印tor 3)，是p160共激活子家族的一员。SI汇．3 被报道在多种肿瘤的恶化过程中起到重要的作用。SI地．3在68％的肝癌中过表 达并且能促进肝癌细胞的增殖、侵袭，成瘤。很多研究小组将SRC．3直接看作 是癌基因，且抑制SRC．3的转录促激活活性是肝癌治疗的有效方法。值得注意 集是SI℃．3保持转录促活性的必须环节，因此如果可以筛选获得特异性和 sI地．3的CID结构域结合的核酸适体，设计出具有功能化的核酸探针，即可潜 激活活性的抑制，为肝癌治疗提供新的思路和方法。 本文以SRC．3重要的CBP／p300募集结构域CD为靶标。构建质粒并获得 Cm．nag融合蛋白，经过12轮筛选，获得了8条与靶蛋白CD高特异性高亲和 力结合的单链DNA核酸适体，以其中最优的一条核酸适体CID撑23作为研究对 象，探究了其与SIⅪ．3的五个不同结构的结合情况，实验证明cⅢjf|}23可以和 CD及S厂r两个结构域相结合。并在后续实验中证明了C脒23可以与Sl℃．3 以及其同源蛋白SRC．1和sRC．2结合。在体外的免疫共沉淀生化实验结果