小白菜植株原位真空渗入遗传转化体系的研究.pdfVIP

摘 要 本研究以三个品种小白菜 ((BrassicacampestrisL.ssp.chinensisvarcommunisTsten etLee) 个菌株 (携带nptII基因和gus基因)和GV3101(携 和hpt基因)介导下，重点研究了植株原位真空渗入遗 传转化体系，包括适宜苗态的建成方法研究、转化影响因素研究、转化体MAP转 化机理初步研究四部分。另外，初步探讨了用浸花方式进行遗传转化的方法。丫验 结论如下: 1.通过自然春化和种子人工低温处理两种途径对适宜苗态建成方法的研究表 明:自然春化条件下，杨凌地区秋季9月7日是三个材料形成最佳适宜苗态的播期; 春季2月17日是上海青和黄心乌形成适宜苗态的播期。而种子人工低温处理中，0- 4C下，上海青 17d，黄心乌25d，四月慢29d，同时7^-9℃下，黄心乌25d，皆能 形成适宜苗态。以上途径相比前者相对较好，但后者也不失为一种较好的方法。 2.影响转化诸因素的研究表明:(1)外源基因向黄心乌转化的效率明显高于其他 两个品种;(2)菌株LBA4404介导转化的效率比GV3101高;(3)渗入培养基中添加 AS对转化率影响不明显，将Ca浓度提高到。.1mol/L转化率为。;(4)真空渗入时 间黄心乌以lmin+间歇30S+30S为佳，上海青和四月慢为2min+间歇30S+30S为佳; (5)打主墓后10d的植株比其他时期的转化率高;(6)植株大小对转化率影响不大;(7) 植株在真空渗入前经0-4℃低温处理7小时转化率高于对照。 3三个材料抗生素抗性试验结果表明:鉴别转化体的标准为植株生长正常，叶 片绿色，有侧根发出或真叶长出或既有真叶长出又有侧根出现。用潮霉素筛选上海 青转化植株时，最佳浓度为30mg/L.筛选黄心乌和四月慢转化植株时，最佳浓度均 为50mg/L;用卡那霉素筛选三个材料转化植株最佳浓度为50mg/Lc筛选的的最佳 时间是从培养基播种后第20天开始。 4.分别用真空渗入处理植株和未处理植株作父、母本和母、父本进行杂交，以 真空渗入处理植株自交作对照，对转化机理进行了初步研究。结果表明花粉和胚珠 皆可作为外源基因的最初受体。 5.将处于盛花期的黄心乌植株浸入农杆菌渗入菌液中进行转化，初步研究了浸 花法。结果表明浸花5min和 lOmin都能得到卡那霉素抗性植株，但浸花 lOmin转 化率低于浸花5mino 6.本研究共得到了卡那霉素抗性植株 170株，潮霉素抗性植株67株。从卡那霉 素抗性植株中随机抽取 15株进行PCR检测，其中8株出现了目标条带。扩增结果 步“说明’源卜基因己整合到植物基因组中厂 关键词:小白菜， 遗传转化，植株原位真空渗入 沙、 onthesystemforin-plantaAgrobacterium-mediatedtransformationwith Study vacuuminfiltrationinpakchoi SongZhengxu Abstract inthisstudy,thesystemforin-plantaAgrobacterium-mediatedtransformationwith vacuuminflitrationinpakchoiwasinvestigatedwiththreepakchoivarieties(Brassica campestrisL.ssp.chinensisvarcommunisTstenetLee)，mediatedbytwoAgrobacterium strains-LBA4404(carryingnpt11geneandgusgene)andGV3101(carryingCaMV CABB-BJIgeneVIandhptgene),whichincludesmethodsofbuildingthesuitableplant shape,transformationinfluencingfactors,tra