药学分生第二章2013：DNA的复制和修复.pptVIP

第一节 DNA的复制 （一）半保留复制 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 RNA引物 DNA聚合酶 不能催化两个游离dNTP在DNA模板上聚合 需要具3’-OH的引物 RNA聚合酶 能催化两个游离NTP在DNA模板上聚合 提供3’-OH 引物最后被DNA聚合酶Ⅰ除去、补满，再由连接酶连接 此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 DNA聚合酶家族 已在大肠杆菌中发现5种不同的DNA聚合酶 DNAP I: 占聚合酶总活性的90% DNAP II: 在DNA修复中起作用(1999年得到证明) DNAP III: 主要的DNA复制酶 DNAP IV: 在DNA修复中起作用（在1999年发现） DNAP V:在DNA修复中起作用（在1999年发现） 在真核生物中，目前发现的DNA聚合酶有五种，分别命名为DNA聚合酶α（pol α），DNA聚合酶β（polβ），DNA聚合酶γ（polγ），DNA聚合酶δ（pol δ），DNA聚合酶ε（polε）。 其中，参与染色体DNA复制的是polα（延长滞后链）和polδ（延长前导链），参与线粒体DNA复制的是polγ，polε与DNA损伤修复、校读和填补缺口有关，polβ只在其他聚合酶无活性时才发挥作用。 四、特殊类型的复制 （一） 线粒体复制 线粒体DNA 双链闭环结构：重链、轻链 取代环复制（D环复制） D-环复制 线粒体和叶绿体DNA通常以D-环的方式进行复制。少数病毒，如腺病毒，也进行D-环复制 。 催化线粒体DNA复制的酶是DNA聚合酶γ，两条链的合成都需要先合成RNA引物，但都不形成冈崎片段，因此都是连续合成。 两条子链的合成在时间上的不同步。  （一）内源性损伤 1. DNA复制错误：错配等 2. 碱基存在互变异构体，形成错误碱基配对 3. 自发的化学变化：脱嘌呤、脱氨基 4. 氧化作用损伤碱基 （二）外源性损伤 物理因素 化学因素 紫外线损伤（共轭双键） 电离辐射损伤（X线/?线） 亚硝酸盐 C U 5-溴尿嘧啶 5-BU A 氮芥类 烷化剂 羟胺 C- A 物理因素： 由紫外线、电离辐射、X射线等引起的DNA损伤。其中，X射线和电离辐射常常引起DNA链的断裂，而紫外线常常引起嘧啶二聚体的形成，如TT，TC，CC等二聚体。这些嘧啶二聚体由于形成了共价键连接的环丁烷结构，因而会引起复制障碍。 化学因素： 碱基类似物：5-BU,齐多夫定…… 碱基修饰剂：亚硝酸、烷化剂…… 二 DNA损伤在药物评价中的应用 诱变育种 常用诱变剂：射线、烷化剂、碱基类似物、移码突变剂等 （二）、噬菌体和病毒DNA的复制 1. 单链环状DNA病毒的复制 1、第一阶段：以亲本单链（＋）为模板，合成 互补链（－），形成闭合的双链环状复制形。 2、第二阶段：滚环复制。一个负链可以合成许多 正链，正链用于噬菌体包装。 3′-OH 5′-P 3′-OH 5′-P 2. 线状DNA病毒的复制 1、双链线状DNA的复制 有两种起始类型：从DNA分子的中间起始 从DNA分子末端起始 腺病毒DNA的复制：从DNA分子末端起始， 以单链置换形式进行。 图 p116页 （2）、单链线状DNA的复制：微小病毒的复制 图 p118页 RNA 模板 逆转录酶 DNA-RNA 杂化双链 RNA酶 单链DNA 逆转录酶 双链DNA 3. 逆转录病毒的复制： 从单链RNA到双链DNA的生成分三步 逆转录酶有三种活性： ①RNA指导的DNA聚合酶活性； ②RNase活性； ③DNA指导的DNA聚合酶活性。 逆转录过程： ① 逆转录病毒RNA与宿主tRNA分子互补形成局 部双链，以tRNA为引物，合成DNA负链5′端。 ② 由RNaseH水解去除杂化双链中的RNA 5′端。 ③ 新合成DNA负链的3′端跳到模板RNA的3′端， 并通过两条链上共同的R序