TO901317激活LXR可增加小鼠脑CYP46与DBP的表达，减少Aβ的产生.pdf

中 文 摘 要 T0901317激活LXR可增加小鼠脑CYP46和DBP的表 达，减少Ap的产生 摘 要 目的:01一淀粉样蛋白(beta-amyloidpeptide,AA)的 沉积是阿尔茨海默病 (Alzheimersdisease,AD)发生发展 的关键因素。研究表明，Ap的产生与沉淀与胆固醇的代谢 有密不可分的关系。抑制胆固醇合成，可明显降低A0的生 成和AD的发病率;而高胆固醇血症则可增加脑A0的免疫 活性。因此，近年来脑胆固醇的代谢调节与Ap生成的关系 成了研究热点。 核受体LXR(liverX-activatedreceptor)也在脑组织表 达，是控制脑胆固醇通量的关键调节位点。T0901317是LXR 化学合成配体。研究发现，配体与LXR结合后，激活ATP 盒转运体 (ATP-bindingcassettetransporter,ABC)ABCA1， ABCG1等与胆固醇代谢有关的下游基因，维持脑胆固醇库 的平衡。APP23转基因小鼠的整体实验和C57BL/6小鼠的神 经元细胞培养实验已显示:用T0901317.22R-轻胆固醇激 活LXR后，ABCA1表达增加、AD水平下降。但正常小鼠整 体水平予以LXR的激动剂，脑中AD如何变化，未见报道。 脑胆固醇通过血脑屏障入血，到肝脏中转化成胆汁酸是 维持脑胆固醇平衡的重要途径。研究表明，出脑的胆固醇大 部 分 是 由神 经 元细胞 内胆 固醇-24S-轻 化 酶 (cholesterol-24S-hydroxylase,CYP46)将其转化为24S-轻 基胆固醇后通过血脑屏障。激活LXR可促进胆固醇从细胞 中 文 摘 要 内向细胞外转出和降低AO，此时脑总胆固醇和细胞内胆固 醇含量如何变化未见报道口CYP46活性如何变化，是否参与 了胆固醇的转出?也未见报道口 D-3一经脂酞辅酶A脱水酶/D-3一经脂酞辅酶A脱氢 酶，简称D一双功能蛋白(D-bifunctionalprotein,DBP)，是 过氧化物酶体0-氧化途径中，特异地催化烯脂酞辅酶A加 水、脱氢的酶蛋白。研究发现，DBP在肝脏催化胆汁酸合成 前体生成24R-轻基胆固醇，是胆固醇向胆汁酸转化过程中不 可缺少的蛋白质。DBP也在大脑的发育过程中发挥重要的生 理作用，但在脑组织中的生化作用机制还不清楚。已知，胆 固醇生成 24S-轻胆固醇不是胆固醇排出大脑唯一的途径， DBP是否能经化胆固醇生成24R-经基胆固醇，在胆固醇转出 脑组织的代谢中发挥作用?值得探讨。 为此，我们给予C57BL/6正常小鼠LXR的强激动剂 T0901317，增加其下游基因ABCA1,ABCG1表达，观察脑 组织内胆固醇和A0量变化，同时观察CYP46和DBP的表 达和活性的变化，探讨CYP46和DBP在大脑胆固醇代谢中 的作用，也为寻找治疗AD新靶点的药物提供实验依据。 方法 1动物分组及取材 将8-10周龄成年雄性C57BL/6J小鼠25只，随机分为: ①对照组 (Control组)10只;②激动剂组 (TO组)15只。 激动剂组动物予以T0901317(20mg/kg/day)灌胃，对照组 给予不含T0901317其它组分相同的液体灌胃。连续灌胃7 天。动物断头处死，迅速取出脑组织置液氮中，于一70℃保存， 用于脑总mRNA的提取、D一双功能蛋白活性、总胆固醇、A 2 中 文 摘 要 0的测定。 2测定指标及方法 ODBP的活性:以D-(一)-3-轻癸酞辅酶A作为底物， 测定单位时间内产物3-酮癸酞辅酶A的生成速度。酶活性用 每毫克蛋白所含酶的单位数表示 (U/mg) ②脑组织总胆固醇的含量:将脑组织胆固醇用氯仿/甲 醇 (2:1VN)抽提，用胆固醇氧化酶一比色法测定。用每 克组织中的胆固醇毫克数表示 (mg/g): ③mRNA 的定量:用异硫氰酸狐一步法提取脑组织总 RNA后，用0-actin作为内参照，应用RT-PCR方法测定脑 组织中D一双功能蛋白、CYP4