《马铃薯块茎特异性启动子克隆及其驱动的hIL12表达载体构建-论文》.pdfVIP

第37卷 第4期 2014年8月 遵 义 医 学 院 学 报 V0I．37 No．4 JournalofZunyiMedicalUniversity Aug．2014 马铃薯块茎特异性启动子克隆及其驱动的hiLl2表达载体构建 杨加伟，李 伟，葛正龙 (遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义 563099) [摘 要]目的 克隆马铃薯块茎特异性的高效启动子Ppatatin并构建其驱动的人 白细胞介素一12(hiLl2)植物表达载体。 方法 提取马铃薯基因组DNA作为模板 ，根据 Genebank数据库信息设计 Ppatatin序列特异性引物 ，通过 PCR扩增获得 Ppatatin片段，并进行测序鉴定；利用 PLACE等数据库对序列进行启动子元件分析；通过重叠 PCR、限制性 内切酶酶切、体 外连接、转化等技术 ，以双元载体pCambia～2301为骨架，构建 Ppatatin驱动的hiLl2表达载体。结果 成功从马铃薯基因组 中扩增得到了1019bp大小的启动子片段，序列分析表明该片段含有典型的启动子元件如TATA—box，以及一些组织特异 性的相关响应元件，符合组织特异性启动子的特征；成功获得 了基于pCambia一2301的Ppatatin驱动的hiLl2植物表达载 体。结论 获得的Ppatatin启动子及其驱动的hiLl2表达载体，为提高hiLl2在植物生物反应器中表达量以及优化马铃薯生 物反应器打下了基础。 [关键词]Ppatatin启动子；人白细胞介素一12；表达载体；植物生物反应器 [中图法分类号]Q785 [文献标志码]A [文章编号]1000—2715(2014)04-0387-06 Cloningoftuberspecificpromoterfrompotato(Solanum tuberosum)andits application inhuman IL ——12expressionvectorconstruction fiawei，LiWei，GeZhenglong (DepartmentofBiochemistry，ZunyiMedicalUniversity，ZunyiGuizhou563099，China) [Abstract]ObjectiveToClonetuberspecificpromoterPpatatinrfompotatoandtoconstructhumanIL一12 (hiLl2)plantexpressionvectordrivenbythispromoter．MethodsSpecificprimersweredesignedbasedon GenebankdatatoamplifythePpatatinrfagmentusinggenomicDNA ofpotatoastemplates．Thedatabasessuch asPLACEwereusedforanalysisofpromoterelements．TechniquesofoverlapPCR，restrictedenzymedigestion， DNA ligationand transformationwereperformed to consturcthiLl2 expressionvectordrivenbyPpatatin using pCambia一2301asbasicvector．ResultsThe1019bpofpromoterrfagmentwasobtainedrfom potatogenome． ThesequenceanalysisshowedtypicalpromoterelementssuchasTATA—boxandseveraltissuespecificresponse elements，whichidentifywiththecharacteristicsoftissuespecificpromoter．ThehiLl2expressionvectordriven byPpatatinwasthenconsturctedsuccessfully．ConclusionTheobtainingofPpatationandhIL12expressionvec- totwouldplayanimportantroleofrimprovingtheexpressionlevelofhiL