黄瓜花叶病毒基因组RNA的定量研究.pdfVIP

摘要 mosaic 黄瓜花叶病毒(Cucumber 寄主最多、分布最广、对农作物危害最为严重的植物病毒之一；该病毒为三分体 病毒，基因组分布在3条RNA分子上。因此基因组结构简单，是研究RNA病 毒在寄主上致病机制的模式病毒之一。本文就CMV与小西葫芦黄化花叶病毒 mosaic (Zucchiniyellow mosaic 和CMV病毒粒子中各基因组RNA的绝对量进行了研究。 1。黄瓜花叶病毒与小西葫芦黄化花叶病毒协生作用的研究 病毒复合侵染发生在植物或动物上，被侵染组织通常表现出比单种病毒侵染 更严重的症状和一种或两病毒积累量的增加。CMV和ZYMV复合侵染是植物病 毒比较典型的协生作用，本研究从宏观和微观不同角度的研究了两病毒的协生关 系。研究发现，两病毒复合侵染寄主后，较单独侵染时明显症状加重、病情指数 (diseaseindex，DI)增加。Real—timeRT-PCR结果显示，复合侵染后两寄主的 CMv．Fny各基因组都有不同程度的影响，在35 dpi，黄瓜上的CMV-Fny各ORF 90％和22％。本研究以real—timeRT-PCR为技术平台，首次精确的量化了单独和 复合侵染时各病毒RNA基因组在两种葫芦科作物上的基因时序变化，建立了一 种以18SrRNA为内参照的RNA相对定量方法。 2．黄瓜花叶病毒与番茄花叶病毒在番茄上的互作的研究 病毒『白J的干扰作用也十分常见，通常表现为一病毒影响另一病毒的复制、 运输、装配等。本试验有关CMV与ToMV在番茄上的互作的结果显示：在预先接 种CMV-Fny的番茄植株一段时问后，植株便获得了抵抗强毒ToMV-N5侵染的能 力，不表现强毒在寄主上的症状。本试验对CMV和ToMV两病毒单独、复合侵染 后，寄主生物反应、生理量、病毒积累等初步的研究，为探讨CMV和烟草花叶 病毒的复合侵染提供研究方法和理论基础。 3．黄瓜花叶病毒卫星RNA番茄分离物的功能初步研究 从浙江省湖州市番茄样品中，分离到一携带卫星RNA的CMV。本研究克 隆了该卫星RNA，并且将其与cMV-Fny假重组于烟草、番茄和西葫芦中，分析 该卫星的存在对辅助病毒症状的调控情况，并采用实时荧光定量PCR分析该卫 同寄主体内CMV各基因组RNA的定量结果检测发现：Tlsat均抑制辅助病毒在 烟草和番茄基因组的积累量，但在番茄寄主中病毒基因组含量受到抑制效应更明 在寄主上的不同症状可能与病毒基因组含量不相关。 4．黄瓜花叶病毒病毒粒子中各基因组RNA的绝对量的分析 CMV为三分体RNA病毒，各基因组RNA分别包被于3种不同的病毒蛋白 外壳内。根据以前的报道，多分体病毒各基因组RNA的量与病毒的致病性相关。 本研究首先通过体外转录所得高纯度的RNA梯度稀释，建立了相应的标准曲线 元回归方程；然后根据CMv-Fny病毒粒子各基因组RNA的。值计算得出各基 blot杂交两种RNA定量的检测方法，并获得了与 Lab,on-a-Chip和Northern real．time RT-PCR一致的结果。本研究也以real-timeRT．PCR为技术平台，首次 精确定量了三分体病毒CMv-Fny各基因组RNA的在其病毒粒子中的比例，建 立了一种用标准曲线的绝对定量方法，为多分体病毒的定量方法提供实践参考和 理论依据。 关键词：黄瓜花叶病毒；小西葫芦黄化花叶病毒；协生作用；荧光定量PCR；番 茄花叶病毒；卫星RNA；相对定量；绝对定量；基因组RNA． Ⅱ Abstract RNA Cucumbermosaic a sense virus(CMV)is typicalsingle—stranded，plus host andhas