99Tcm标记EGFR+mRNA反义肽核酸荷瘤卵巢癌基因显像研究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………4 英文缩写…………………………………………………………………7 研究论文99Tcm标记EGFR mRNA反义肽核酸荷瘤卵巢癌基因显像 的研究 前言…………………………………………………………………8刖舌…………………………………………………………………8 材料与方法…………………………………………………………9 宝日才…………………………………………………………………1)结果…………………………………………………………………15 附图…………………………………………………………………18 附表…………………………………………………………………28 讨论…………………………………………………………………．30 结论…………………………………………………………………35 参考文献……………………………………………………………36 综述肿瘤基因反义显像的研究进展…………………………………4l 致谢………………………………………………………………………53 个人简历…………………………………………………………………55 中文摘要 99Tcm标记EGFRmRNA反义肽核酸荷瘤卵巢癌 基因显像的研究 摘 要 factor 目的：研究99Tcm标记表皮生长因子受体(Epidermalgrowth nucleic receptor,EGFR)mRNA反义肽核酸(peptideacid，PNA)行EGFR基 因分子探针的制备，测定其标记率及放化纯，评价其在体内外的稳定性， 并探讨其在EGFRmRNA表达阳性卵巢癌荷瘤裸鼠体内分布及体内显像 的情况，以探索核素基因显像在活体内评价肿瘤基因表达状况，为肿瘤早 期特异诊断和靶向治疗及疗效评价提供新的分子影像学方法。 方法：针对EGFR 201283．1)的第 mRNA(genbank序列号：NIX4 503．5 5 19碱基序列(17bp)，设计反义PNA 及无义PNA 7端，此四个氨基酸可形成一个类似N4结构的强螯合 Gly．Gly)连接在其5 基团，在PNA与四个氨基酸之间再引入一个隔离物丫．氨基丁酸(4．amino． butyric 液相色谱法(hi．ghperformanceliquid 针的标记率及放化纯，并分别测定其在室温下静置、与生理盐水及人新鲜 其在体外的稳定性；收集了注射99Tcm-EGFRmRNA反义及无义PNA探 裸鼠体内的稳定性。采用静置贴壁法培养人卵巢癌SKOV3细胞，收集对 孔板中，6x105个细胞／每孔(2009L／孔)，然后置于培养箱中进行培养。 待细胞长满至整个孔的80％。90％后，换新鲜培养基，然后加入30uL (37kBq)稀释好的反义或无义PNA溶液，再置于培养箱中分别培养l、 2、4、6、12、24h后收集其上清及沉淀，测定其放射性计数，计算不同 时间的摄取率并比较有无差异。将稀释好的30此99Tcm-EGFRmRNA反 分别在培养箱内培养6h后，迅速移去培养基并换成新鲜培养基，再置于 中文摘要 培养箱中继续培养至1、2、4、6、12、24小时收集每孔的上清及沉淀， 并测定其放射性计数。计算不同时刻的细胞滞留率，初步探讨两种探针在 人卵巢癌SKOV3细胞中的药代动力学。采用逆转录．聚合酶链反应 Chain (ReverseTra