微小RNa-214在大鼠心肌细胞氧化应激损伤中的作用及其机制.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文微小t斟A-214在心肌细胞氧化应激损伤中的作用及机制 前言……………………………………………………………………．99日lJ吾……………………………………………………………………．． 材料与方法……………………………………………………………9 结果……………………………………………………………………23 附图…………………………………………………………………一27 附表…………………………………………………………………．．35 讨论……………………………………………………………………38 结论……………………………………………………………………42 参考文献……………………………………………………………．．42 综述微小RNA在心肌肥大中的作用及机制…………………………．46 致谢…………………………………………………………………………．．53 个人简历…………………………………………………………………．．54 中文摘要 4在大鼠心肌细胞氧化应激损伤中的作用 微小Rtl^-Itl 及机制 摘 要 目的： 心血管疾病的发病率和死亡率很高，是危害人类健康的主要 疾病之一，关于心血管疾病在分子学和基因学上的发病机制的研究倍受学 发育及诸如心肌肥大，心力衰竭，心肌梗死等许多心血管疾病中都扮演重 要角色。 在心梗的发病过程中活性氧化物(reactive oxygen 梗死区及非梗死区均增加，ROS可加速心肌缺血，诱导细胞凋亡。更有 许多证据表明ROS作为信号转导中介，具有激活转录因子及基因表达， 促进细胞增长及凋亡的作用。H202是ROS的一种，实验中经常被用来模 调节心肌细胞凋亡的的靶基因。 方法： l乳鼠心肌细胞的分离培养及鉴定。取出生1．3天的SD大鼠乳鼠， 低温麻醉，清洗干净后开胸，取出心室肌组织剪成小块，消化液消化，直 至组织消化完全，收集消化液过滤、离心、重悬后，在含有13％胎牛血清 及1％青链霉素的DMEM／F12完全培养基中差速贴壁1h，更换培养瓶再 加入0．1mmol／LBrdu来纯化心肌细胞。48h后更换为完全培养基，以后每 2天换一次液。坚持每天倒置显微镜下观察细胞变化。培养3天后心肌细 胞呈梭形、多角形等不规则形态，伸出突起相互连接交织成网，并出现成 片同步搏动，频率多为60—100次／分，3—7天细胞活力均保持较好状态，适 合实验研究。 a．actin抗体免疫细胞化学染色显示：心肌细胞胞质被染成棕黄色丝状 中文摘要 75％．85％。 2心肌细胞氧化应激损伤模型的建立。用H202诱导体外培养的原代 心肌细胞损伤。实验分正常对照组(normal 化损伤的适当浓度及时间。根据MTT摸索的心肌细胞氧化应激损伤模型 的时间与浓度，实验分正常对照组(normal 心收集细胞，Annexin 凋亡率。进一步确定H202浓度，建立心肌细胞H202氧化应激损伤模型。 3 14表达变化。培养的大鼠心肌 H202干预心肌细胞后观察miRNA．2 细胞给予H202，分空白对照组和H202干预组(浓度分别为30、50、 的相对表达变化。 4 细胞凋亡率变化。原代心肌细胞经72h培养并用转染的方法上调或下调 上流式细胞仪检测不同转染组的心肌细胞经H202诱导后的凋亡率。 5Western blot检测不同干预组PTEN的蛋白表达变化培养细胞分为 蛋白进行蛋白定量检测。 结果： 1 的升高，作用时间的延长，细胞活力(OD值)逐渐降低，呈明显的剂量 逐渐增加，呈明显的剂量依赖性，说明H202可诱导心肌细胞损伤。我们 中文摘要 化应激损伤模型。