硫化氢参和新生期结肠炎性刺激诱发成年大鼠内脏痛的分子机制的研究.pdfVIP

硫化氢参与新生期结肠炎性刺激诱发成年大鼠内脏痛的分子机制研究 中文摘要 中文摘要 目的 （1）研究CBS 调控电压门控型钠通道在新生期结肠炎性刺激诱导的慢性内脏 痛中的作用； （2 ）研究去甲肾上腺素（NE ）通过CBS 调控辣椒素受体 （TRPV1 ）在新生 期结肠炎性刺激诱导的慢性内脏痛中的作用； 方法 1. 对出生十天的新生期雄性大鼠在肛门处插入2 cm 注射0.2 ml 的0.5% 的冰 醋酸(AA)造成新生期结肠炎性刺激 (NCI) 从而诱导成年大鼠的结肠慢性痛过敏 模型。运用腹壁撤回评分（AWR score ）方法评测NCI 大鼠的痛行为反应。 2. 结肠管壁注射荧光素（DiI ）来标记结肠特异性背根节（DRG ）神经元， 运用全细胞膜片钳方法研究NCI 大鼠中肠相关DRG 神经元电压依赖型钠通道的变 化特性。 3. 运用ELISA 试剂盒检测NCI 模型大鼠血清中去甲肾上腺素（NE ）的水平。 4. 运用Western Blotting 方法检测NCI 模型大鼠肠相关DRG 神经元中CBS, 钠通道蛋白和TRPV1 受体蛋白表达情况。 结果 1. NCI 明显增加大鼠对结肠扩张的过敏反应，六周时，AWR 评分显著高于对 照组，这种痛觉反应持续至少三周。在第十周和第十二周时，AWR 评分恢复到正 常水平。 2. NCI增加肠相关DRG神经元（T13-L2 ）电压门控型钠通道的电流密度和 NaV 1.7和NaV 1.8的蛋白表达水平。而十周龄时NCI组和对照组的肠相关DRG神经元 电压门控型钠通道的电流密度和NaV 1.7和NaV 1.8的蛋白表达水平均没有显著差异。 同样地，我们检测了六周龄NCI组和对照组的非肠相关神经元(L4-5)DRG，发现电 压门控型钠通道的电流密度和NaV 1.7和NaV 1.8 的蛋白表达水平均没有显著差异免 疫组化三标技术显示在DRG肠特异性神经元中CBS和NaV 1.7或NaV 1.8共表达。 I 中文摘要 硫化氢参与新生期结肠炎性刺激诱发成年大鼠内脏痛的分子机制研究 3. 与对照组相比，NCI组CBS 的表达水平显著上调。CBS 的拮抗剂AOAA翻转 NCI 引起的大鼠内脏痛觉反应，最优剂量10mg/kg的药效持续至少一个小时。并且， AOAA翻转NCI 引起的肠相关DRG神经元钠电流密度的增加和NaV 1.7和NaV 1.8 的 蛋白表达水平的增加。 4. 在最佳剂量下，非选择性β 肾上腺素受体拮抗剂，而不是α 肾上腺素受体 拮抗剂，明显翻转由HIS 诱导的大鼠结肠痛过敏。进一步研究发现，阻断β2 肾上 腺素受体明显降低由应激导致的AWR 高评分，而β 和β 肾上腺素受体拮抗剂对 1 3 这种高评分没有明显作用。 5. NE 参与内脏痛敏感的形成。与对照组相比，ELISA 结果显示，NCI 大鼠血 清NE 激素水平显著上调。但是，β 受体蛋白表达水平与对照组相比没有明显变化。 2 而且，去甲肾上腺素能诱导大鼠内脏痛过敏反应。 6. TRPV1 表达水平上调是由NE 介导的。NCI 大鼠肠相关DRG 神经（T -L ） 13 2 中，TRPV1 蛋白表达显著上调。给予正常大鼠NE ，肠相关DRG 神经元（T -L ） 13 2 中TRPV1 的蛋白表达水平显著上调。给予NCI 组大鼠非选择性肾上腺素受体β 拮抗剂，显著