表达人源化糖蛋白的家蚕BmN细胞系的建立.pdfVIP

摘 要 自上世纪80年代杆状病毒介导的外源基因表达首次报道以来，已有近千种外源蛋 白在该系统中得以成功表达。由于其效率高、周期短、成本低等优点，如今昆虫．杆状 病毒表达系统已发展为四大表达系统(原核表达系统，酵母表达系统，哺乳动物细胞表 达系统)之一。但是随着认识地深入，人们逐渐发现该系统也存在着一些重大缺点，主 要表现在昆虫／昆虫细胞内表达的蛋白质往往呈现不具备唾液酸化的复杂的蛋白质糖链。 然而，糖链在糖蛋白发挥功能的过程中往往扮演着重要作用，如末端唾液酸化的蛋白质 在血液中的半衰期明显比无唾液酸化得蛋白质长。已有研究表明，昆虫．杆状病毒表达 系统不能产生复杂糖链的糖蛋白这主要归结于昆虫细胞内缺少哺乳动物细胞糖基化修 饰过程中一些必要的糖基转移酶。另一方面，昆虫细胞内特异性的N．乙酰氨基葡萄糖 萄糖残基切除，从而阻止N．糖链进一步延长。 本研究通过克隆得到哺乳动物细胞中糖基化所必须的基因N．乙酰葡萄糖胺转移酶II， 将它们及GFP基因和Neo‘基因共同转座至家蚕BmN细胞系的基因组中，通过G418筛选 splinkerette．PCR表明所得的转基因细胞系中含有并且能表达上述四个基因。 另外，我们利用RNAi(RNA PCR来检测 GlcNAcase的表达．结果表明80 合成。 本文首次尝试通过向家蚕细胞中导入来自哺乳动物细胞的糖基转移酶，并干扰抑制 该系统的应用领域． 关键词：家蚕；昆虫．杆状病毒表达系统；糖基化；糖基转移酶；RNAi ABSTRACT Sincethefirst was in foreignproteinsuccessfullyexpressed in1 arethousandsof inthis 980s，there proteinsexpressedsuccessfully expressionsystem untilnow．Duetoits andlow cost，the system highefficiency,lesstime-consuming four cornmen beoneofthe most insect-baculovirus hasbeen to expressionsystem developed used and sysremsincludingProkaryoticexpressionsystem，yeastexpressionsystems mammaliancell with ofthe Silldy,thedisadvantage expressionsystem．Butin—depth ofitsfailuretoadd insect—baculovirus Was because expressionsystemhighlighted，m