《分子病毒学实验方法》.pdfVIP

病毒学研究方法 病毒学研究方法 诊断技术的发展历史 诊断技术的发展历史 20世纪60、70年代 20世纪60、70年代 免疫学技术-电镜-动物实验-细胞培养: HBV，HAV ，HDV 20世纪80年代 20世纪80年代 分子生物学: HCV ，HEV 1995年 1995年 美国GBV-C/HGV ？ 1997年 1997年 日本 TTV ( Transfusion Transimitted Virus) ？ 最近 最近 SEN (在一位首写名为SEN的HIV静脉吸毒者患 者血液中发现了一种新的DNA病毒) ？ 病毒学研究方法 病毒学研究方法 活的宿主体系 组织培养技术 血清学/免疫学方法 病毒超微结构的研究方法 分子生物学方法 活的宿主体系：植物、动物 活的宿主体系：植物、动物 起初的病毒学研究是建立在活的宿主体系之上的。 动物宿主体系主要应用在生产不能体外繁殖的病毒、研究 病毒感染的病理作用、检测疫苗的安全性等。 植物宿主体系目前应用仍较广泛 20世纪初．鸡胚开始用于病毒的研究。 1943，我国学者黄祯祥就开始利用鸡胚组织块在试管内进行 病毒传代、定量滴定及中和实验。 1948-1955年，动物病毒的研究从利用实验动物整体过渡到 利用组织培养。小鼠、昆虫、鱼、猪、狗以及各种灵长类包括 人的Hela细胞系的体外培养相继建立。 Embryonated egg: the source of influenza vaccine today Chorio-allantoic membrane Air sac Yolk sac Allantoic fluid 组织培养技术 组织培养技术 1949年John Enders等在原代人体细胞中繁殖出脊髓灰质炎 病毒； 组织培养技术促进了病毒疫苗的研究； 1952年，R. Dulbecco利用组织培养技术发展出空斑定量病 毒的方法，首次测定脊髓灰质炎病毒和西方马脑炎病毒的侵 染性颗粒。 动物细胞培养 动物细胞培养 • 开辟了定量动物病毒学的新领域以及研究病毒的复制及其与 寄主相互关系的新技术。 • 动物细胞组织培养技术的开发使脊髓灰质炎病毒的疫苗能在 体外培养的猴肾细胞中培养并大规模生产。 • 利用组培技术能较方便地诱导减毒弱株系，开发新疫苗。 Adenoviruses plaques Poliovirus plaques Fibroblasts in culture Epithelial cells in culture Cytopathic effect induced by adenoviruse Uninfected cells Infected cells Measles virus - induced polykaryocytes 血清学/免疫学方法 血清学/免疫学方法 • 免疫沉淀法 • 中和试验 • 补体结合试验 • 免疫荧光法 • 酶联免疫吸附测定法 Hemagglutination- inhibition assay (Differentiates between members of the same group) RBC + Viru