人类CD8^＋记忆T细胞体外扩增方法的研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(7)：1339．1344 · 1339 · [文章编号】 1000-4718(2013)07·1339-06 · 实验技术 · =I： 人类 CD8+记忆 T细胞体外扩增方法的研究 罗海华， 周 南， 张 旭， 郭学敏， 张 辉， 刘 超 (中山大学人类病毒学研究所，热带病防治研究教育部重点实验室，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：研究体外扩增人类 CD8记忆T细胞的新方法，为抗病毒与抗肿瘤的过继性免疫治疗提供 新的手段。方法：将anti．CD3抗体、anti．CD28抗体、CD70、白细胞介素(IL)-2、IL-7和IL．15进行排列组合，设计出 63种刺激方式，对体外分离得到的正常人外周血 CD8 T细胞进行体外扩增；培养 14d后进行细胞计数，并检测 CD8 T细胞的纯度以及 CD8 中枢记忆T细胞(TCM)和 CD8效应记忆 T细胞(TEM)所占的比例，进而计算出 CD8 T细胞、CD8 TCM和 CD8 TEM的体外扩增倍数，从而确定理想的刺激方法。结果：体外扩增CD8 T细 胞、CD8 TCM和CD8 TEM的理想刺激方式均为nati-CD3抗体、IL-2和IL-7三者的组合 ；该刺激方式使 3种细胞 在培养 14d后分别扩增了l3．19、l3．28和 15．27倍。结论：Anti．CD3抗体、IL-2和IL-7三者的组合 ，是刺激人类 CD8记忆T细胞体外扩增的相对理想方法。 [关键词] 过继性免疫治疗；CD8记忆T细胞；体外扩增 【中图分类号] R329．21 【文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2013．07．034 M ethodsforexpansionofhumanCD8 mem0rvT cells／nvitro LUOHaihua，ZH0U Nan。ZHANG Xu，GUO Xue-min，ZHANG Hui。UU Chao (InstituteofHumanVirology，KeyLaboratoryofTropicalDiseaseControlofMinistryofEducation，SunYat-senUnivemity， Guangzhou510o80，China．E．ma il：chaoliulc2O13@ 126．corn) [ABS’rI CT] AIM：Toinvestigatenewmethodsforhteexpnasionofhumna CD8 memoryTcellsinvitronad providenovelmeansofanti．viralandna ti．tumoradoptiveimmunotherapy．M THoDS：Sixkindsofstimuli。anti—CD3an- tibody，nati-CD28natibody，CD70，IL-2，IL-7na dIL-15，fortheexpnasionofhumna CD8 memoryTcellsinvitrowere selectednadarrnagedofrtheircombinations。resultingin63kindsofstimulatingcombinations．NormalhumanCD8 T cellswereisolatednadexposedtohtesestimuli．After14daysofcellculture，thenumberandpurityofCD8 Tcells，nad thepercentagesofCD8 centralmemoryTcells(TCM)andCD8 effectormemoryTceils(TEM)were