DNA电化学生物传感器中地新方法学研究.pdf

DNA片断的选择性测定和对目标蛋白的准确识别，为基因及蛋白质分析测定提 供了一种简便、便捷、廉价的新理念。 第一章绪论 首先介绍了DNA电化学生物传感器的研究进展。着重介绍了DNA生物传 感器的原理(包括DNA探针及其分子识别原理和探针DNA在固体基质表面的 固定化)和DNA生物传感器中不同的杂交电化学标示剂，叙述了DNA电化学传 感器在基因检测等方面的应用。接着介绍了核酸适配体生物传感器和碳纳米管在 生物传感器中的一系列应用。最后阐述了本论文的目的和意义，指出论文的创新 之处及主要研究内容。 第二章基于蛋白与其核酸适配体的替代机理构建的凝血酶电化学生物传感器的 研究 我们基于目标蛋白与其核酸适配体替代机制构建的设计了一种电化学适体 传感器。该传感器预先将含有巯基的单链固定DNA(IP)与目标凝血酶(衄ombin) 于金电极表面，而另一标记有CdS纳米颗粒的单链DNA(DP．CdS)被用作检测探 针。当预先制备好的双链DNA修饰金电极浸入含有凝血酶与DP．CdS的共存的 粒溶解，使用汞膜电极对溶出的Cd2+离子进行电化学检测，获得灵敏的电化学信 有良好的线性响应，检出限为4．3×10。13mol／L。检测具有良好的特异性，BSA， 溶菌酶等其他蛋白质共存不会影响tllroInbin的检测。 第三章基于DNA竞争替代机理的电化学开关生物传感器的研究 我们设计了一种基于DNA之间杂交竞争替代机制的电化学DNA传感器。 该传感器通过预先将3’修饰了巯基，5’修饰了二茂铁的发夹探针DNA与识别 DNA杂交形成双链DNA，然后通过金硫键将其组装于金电极表面。此时二茂铁 位于双链DNA的顶端，远离电极表面，呈现出“S谢tch．ofr状态，仅仅产生一 个小的背景信号。目标DNA加入后，由于与识别DNA之间具有更多互补碱基， 在杂交的竞争作用下，识别DNA离开探针DNA，与目标结合，探针DNA随之恢 复原有的发夹状态，二茂铁靠近电极表面，呈现出“S谢tch．on状态，同时获得 一个较大的电化学信号。通过目标加入前后电化学信号变化，可实现对目标的检 测。本文将适体技术、电化学分子信标技术相结合，实现了对目标DNA和蛋白 质的灵敏、高效、方便的检测。此电化学竞争开关生物传感器有望在生物检测领 域有更广泛的应用。 第四章基于伊一环糊精主客体识别和CdS纳米颗粒构建的电化学生物传感器 我们基于主客体分子识别技术设计了一种不需要固定探针DNA的电化学检 测DNA的新方法。这种传感技术采用了一种新颖的以茎环结构形式存在的双标 作为客体分子，另一端连接了CdS纳米颗粒作为电化学指示剂指示杂交反应的 发生。同时使用环糊精修饰的电极捕获DLP上标记的dabcyl。杂交反应发生前， 探针保持茎环结构，迫使dabcyl分子靠近CdS纳米颗粒。由于空间立体效应， 阻碍了dabcyl与电极表面肛CD的结合，导致DLP不能被电极捕获。与目标DNA 杂交后，DLP的茎环结构展开，使得dabcyl分子易于进入修饰电极表面的肛CD 空腔中，进而DLP信号可以被卢CD修饰电极捕获。并且，捕获效应与目标DNA 浓度成正比。 第五章基于主客体识别作用构建的非固定的DNA电化学生物传感器的研究 在这篇文章中，我们基于主客体分子识别技术构建了电化学检测DNA的新 方法。这种传感技术采用了一种新颖的以茎环结构形式存在的双标记DNA探针 分子，另一端标记了金胶作为电化学指示剂指示杂交反应的发生。同时采用 仅．CD／MCNTs／GCE电极捕获杂交反应转换产生的电化学信号。杂交反应发生 前，双标记DNA探针保持茎环结构，迫使dabcyl分子靠近金胶。由于金胶的空 间立体效应，阻碍了dabcyl与电极表面仅．CD的结合，导致DLP不能被电极捕 获。与目标DNA杂交后，DLP的茎环结构展开，使得拙cyl分子易于进入修饰 电极表面的仅．CD空腔中，进而DLP信号可以被及．CD修饰电极捕获。并且， 捕获效应与目标DNA浓度成正比。因此，与目标的杂交过程可灵敏地转换并检 测DLP标记的金胶AuCl4。的电化学还原电流信号。采用这种新方法，检测目标 DNA的浓度可低至2．6×10‘10M甚至对单碱基错配也有很好的区分能力。 第六章基于环糊精修饰的纳米颗粒构建的电化学生物传感器的研究 我们构建了一种基于环糊精修饰的纳米颗粒的电化学DNA传感器，将DNA 杂交引起的探针DNA构型变化通过主客体识别技术与纳米颗粒标记结合，并转 换为电化学信号。该传感器中，末端标记有4．4．二甲氨基苯基偶氮苯甲