DNA甲基化检测和银离子识别的新方法研究.pdfVIP

摘要 DNA甲基化检测与银离子识别的新方法研究 物理化学专业硕士研究生：王刚林 指导教师：李念兵教授 摘要 DNA甲基化是一种重要的表观遗传学性质，在细胞分化，调控基因转录和修 复等生物过程起着重要作用，由于其与很多疾病例如癌症有直接关系，因此成为 当前研究的热点课题。金纳米棒(GNRs)因其各向异性结构和独特的光谱特征而 倍受化学研究者青睐，得到飞速的发展，广泛应用于金属离子和氨基酸检测、免 疫分析、DNA序列分析、癌细胞成像和光热治疗以及纳米材料组装等领域。水体 重金属污染具有持久性、高度危害性和难治理性，如何快速、准确监测并对其进 行科学评价，成为当今环境科学关心的热点问题。银离子是一种高毒性且在环境 中污染相当普遍的金属离子，开发灵敏检测Ar的方法十分重要。基于以上所述， 本文开展了以下研究工作： 1．电化学策略检测DNA甲基化和DNA甲基转移酶活性 发展了一种免标记的电化学检测DNA甲基化的技术，该方法首先在金电极上 构构筑一个电化学DNA传感器，以六氨合钉(RuHex)为电化学信号指示剂，当 电极表面的DNA在特定位点被甲基化后，能够被特异性的酶切割，从而脱离电极 表面，导致电化学传感器的电化学信号降低。甲基转移酶的活性与电化学信号成 一定线性关系，从而实现了对DNA甲基转移酶活性的测定。该方法对Dam甲基 转移酶的活性检测区间为0．25—10 U／mL，检测限为O．18U／mL(S爪=3)，在此基础 上，我们将此方法进一步用于筛选DNA甲基转移酶的抑制剂，为新的抗癌药物的 筛选提供了一种新的思路。 2．荧光共振能量转移法检测DNA甲基化和DNA甲基转移酶活性 基于金纳米棒与不同长度的DNA链相互作用荧光共振能量转移效率的差别， 发展了一种荧光检测DNA甲基化的新方法。当形成DNA双链时，金纳米棒与DNA 双链之间的静电作用很强，从而导致荧光标记的DNA荧光猝灭，当双链被甲基转 MasterThesisofSouthwest University 移酶甲基化后，能够被核酸内切酶切割成小的片段DNA，片段DNA与金纳米棒 之间的静电作用很弱，从而导致荧光恢复，通过荧光的恢复程度，来实现对DNA 甲基转移酶活性和甲基转移酶抑制物的分析，该方法对DNA甲基转移酶活性的检 测限可以达到0．5U／mL，具有简单、快速、选择性良好等特点。 3．以金纳米棒为信号探针构建DNA生物传感器检测A， 利用金纳米棒与DNA单链和DNA双链的静电作用力不同，构建了一个新的 A矿生物传感器。随着A，的加入，c_C错配的碱基对形成c_A矿-C结构，导致 DNA电荷密度增大，从而使得与金纳米棒之间静电作用增强，引起金纳米棒的团 聚，并导致金纳米棒的横向紫外吸收峰降低。通过金纳米棒紫外吸收的信号的变 化实现对银离子检测，该传感器用于检测银离子的检测限可以达到15 nM(S／N=3) 获得了比较满意的结果。 关键词：DNA甲基化，电化学，金纳米棒，荧光共振能量转移，静电作用 Il of DNA Aassy andanewmethodfor methylation detection ofAg(I) Master of Lin Physcial Chemistry：Gang W