栽培花生基因组BAC文库构建.pdfVIP

lfff『I『|fI川删 644 摘要 栽培花生(Arachis L．)是异源四倍体，含有A和B两个基因组。 hypogaea 现有研究认为四倍体栽培种是由二倍体种A．duranensis(A genome)单一杂交后经染色体自发加倍而成。单一杂交起源、多倍化引起的生殖 隔离和少数育种亲本的使用，使栽培花生基因组高度保守，遗传多样性非常有 限，因此，利用遗传作图的方法分析基因十分困难。花生基因组BAC文库的构 建，对利用物理图谱的方法来分析花生基因组有很大的价值，可从该文库中调 取大量有用的基因，在利用基因工程技术改良作物品种性状、开展分子育种等 方面发挥重要作用。 本实验以栽培花生中花8号植株叶片为材料，参照己报道的BAC文库构建 方法，在此基础上进行技术改进，建立了一套适用于栽培花生品种的BAC文库 构建技术体系。选取幼嫩的植物叶片，得到了浓度适宜，分子量大于1Mb的高 分子量DNA琼脂糖包埋块儿，选择合适的酶切条件回收到符合分子量要求的 DNA大片段，通过建立高效的连接体系，到目前为止共得到25，344个重组克隆。 随CLOg取80个克隆经小量碱裂解法提取质粒酶切鉴定，脉冲凝胶电泳结果显示， 随机挑取3个BAC克隆做稳定性继代实验，连续培养100代之后，BAC克隆依 然稳定，没有重排现象。 本实验构建的BAC文库是我国迄今构建的第一个栽培花生BAC文库，尽 管文库覆盖率到目前为止还不能满足作图和测序的需要，但是建立了一个完整 高效的适用于栽培花生基因组的BAC文库构建技术体系。 关键词：栽培花生；BAC文库；文库构建 AbStract Abstract Cultivated all ofrecent peanut0rach捃hypogaeaL．)isallotetraploidorigin，with allAABB was that isarosefrom oftwo genome．Itreportedallotetraploid hybridization wild species，A．duranensis(Agenome)andA．枷誊瑚西(Bgenome)，and spontaneous chromosome isolationresultedt％m and duplication．Reproductive polyploidization limit haveledtolimited ofallelic of ofbreedingparents availabilitycombinations，lack insome ofthe of is variability traits．Therefore，the important analysisgenomepeanut difficulttoberealized artificialchromosome bygeneticlinkagemapping．Bacterial alefundamentaltoolsfor for