第三章 微生物细胞破碎.ppt

第三章 微生物细胞破碎 第一节 细胞壁的组成与结构 第二节 常用破碎方法 第三节 破碎率的测定与破碎技术的 研究方向 基本要求： 了解细胞壁的组成与结构和常用破碎方法及破碎技术的研究方向，掌握破碎率的测定方法。 重点： 细胞壁的组成与结构；细胞壁结构与细胞破碎；常用破碎方法；破碎率的测定。 微生物的代谢产物可以分成两类：胞内产物和胞外产物（多数）。 胞外产物：分泌到细胞外的代谢产物。如大多数小分子代谢产物、细菌产生的碱性蛋白酶、霉菌产生的糖化酶等。 胞内产物：微生物分泌并在细胞内累积的代谢产物。如大多数酶蛋白、类脂、部分抗生素、基因工程产品（胰岛素、干扰素、白细胞介素-2等）。 第一节 细胞壁的组成与结构 细菌细胞壁 酵母菌细胞壁 霉菌细胞壁 细胞壁结构与细胞破碎 细胞破碎的目的是破坏细胞外围使胞内物质释放出来。微生物的外围通常包括细胞壁和细胞膜。 细胞壁：为细胞外壁，具有固定细胞外形和保护细胞免受机械损伤或渗透压破坏的功能。 细胞膜：为细胞内壁，是一层具有高度选择性的半透膜，控制细胞内外一些物质的交换渗透作用。 细胞破碎的主要阻力来自细胞壁，不同类型的微生物、处于不同生长时期的同一种微生物，细胞壁的结构特性是不同的，取决于遗传和环境因素。 第二节 常用破碎方法 珠磨法 高压匀浆法 超声破碎法 酶溶法 化学渗透法 其他方法 细胞破碎方法按是否使用外力分为机械法和非机械法。 机械法有：珠磨法、高压匀浆法、超声破碎法等。 使用机械法时，机械能转为热量，温度升高，多数情况下采用冷却措施。 非机械法有：酶溶法、化学法、物理法、干燥法等。 一、珠磨法（Bead mill） 工作原理： 进入珠磨机的细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英砂、氧化铝等研磨剂一起快速搅拌或研磨，研磨剂、珠子和细胞之间剪切、碰撞，使细胞破碎，释放出内含物。 实验室规模：Mickle高速组织捣碎机和Braum匀浆器。 中试规模：胶质磨 工业规模：高速珠磨机 破碎作用符合一级反应动力学，破碎程度用细胞破碎率（%）或单位细胞释放的内含物（mg/g）表示。 影响反应速率常数K的因素： 珠体直径：以细胞大小、浓度为选择依据； 珠体的装量要适中； 搅拌速度应适当：速度高，破碎率提高，能耗大； 操作温度：温度高，易破碎，控制在5~40℃，使目的产物不受破坏； 细胞浓度； 料液性质 延长研磨时间、增加珠体量、提高搅拌转速和操作温度等都可有效地提高细胞破碎率。 高破碎率将大大增加能耗；温度升高；大分子物质损失增加；细胞碎片较小，不易分离。 珠磨法的破碎率一般控制在80%以下。 影响破碎的主要因素： 压力：增加压力，破碎率提高，但机械磨损较大，高压室的压力为55~70MPa。 通过匀浆器次数：增加次数，提高破碎率； 温度：控制使目的产物不受破坏； 细胞破碎的主要阻力来自细胞壁，破碎率与微生物的种类和生长环境有关： 酵母细胞较细菌难破碎； 静止状态的细胞比快速生长状态的细胞难破碎； 在复合培养基上培养的细胞较简单合成培养基培养的细胞难破碎。 在工业规模中，酵母等难破碎的细胞及高浓度的细胞，用多次循环破碎的方法。 不宜采用高压匀浆法破碎的细胞： 易造成堵塞的团状或丝状真菌； 较小的革兰氏阳性菌； 含有包含体的基因工程菌（包含体质地坚硬，易损伤匀浆阀）。 细胞壁溶解酶由多种酶组成。 溶菌酶主要用于细菌； 其它酶对较酵母效果较好。 溶酶具有高度专一性，使用时要根据细胞壁结构和化学组成选择适当的酶，并确定相应的次序。 微生物细胞的自溶法常采用加热法或干燥法。 工业生产的典型例子是酵母自溶物制备。 自溶法的缺点：对不稳定的微生物，易引起目的蛋白质的变性，此外，自溶后细胞悬浮液粘度增大，过滤速率下降。 （1）表面活性剂 可促使细胞某些成分溶解，其增溶作用有助于细胞的破碎。