不同配比冻存液对兔脂肪干细胞液氮冻存效果的研究.pdf

中国美容医学2015年5月第24卷第9期 ChineseJournalofAestheticMedicine．May．2015．Vo1．24．No．9 · 基础研究 · · 论著 · 不同配比冻存液对兔脂肪干细胞液氮冻存效果的研究 姚永明 ，张 帆 ，张泽敏 ，阎 贺 ，吴彩凤 ，胡 飞 ，牛常英 ，杨彪炳 (1．潍坊医学院 山东 潍坊 261053；2．费县人民医院 山东 临沂 273400) [摘要]目的：探究不同浓度配比冻存液对脂肪干细胞 (Adipose-derivedStemCellS，ADSCs)冻存复苏后存 活率及增殖活性的影响。方法：无菌条件下取新西兰大白兔的脂肪组织，体外分离、培养ADSCs并传代至第3 代 ，行免疫细胞化学染色对其表面标志物进行鉴定，同时对其行成软骨及成表皮细胞诱导以证实其多项分 化能力。将第3代ADSCs置于液氮(一196℃)中冻存 ，根据冻存液中培养基 (DMEM)、胎牛血清(Feta1bovine serum，FBS)及二 甲基亚砜 (DimethylSU1foxide，DMSO)的配比不同分为8组：①含不同浓度FBS配比分组 ：A 组 (70％DMEM+20％FBS+IO％DMSO)、B组 (60％DMEM+30％FBS+10％DMSO)、C组 (50％DMEM+40％FBS+IO％DMS0)、D 组 (含有40％DMEM+50％FBS+10％DMSO)；②含不同浓度DMSO配比分组：E组 (55％DMEM+40％FBS+5％DMSO)、F组 (50％DMEM+40％FBS+IO％DMSO)、G组 (45％DMEM+40％FBS+I5％DMSO)、H组 (40％DMEM+40％FBS+2O％DMSO)。细胞冻 存三个月后，对其进行复苏并观察细胞形态学变化；通过细胞计数计算细胞存活率；采用MTT法绘制复苏后 细胞生长曲线，以测定其生长增殖情况。结果：细胞复苏后，通过细胞计数计算结果显示C、D组存活率明显 高于A、B组 (P0．05)，E、F、G、H四组之间有统计学意义 (P0．01)；MTT法结果显示c、D、F组的增殖曲线与未 冻存组无明显差异 (JD0．05)。结论 ：从兔脂肪组织中成功分离出了ADSCs，并且能在体外培养过程中稳定 生长，快速增殖；ADSCs冻存液比例选择以DMEM：FBS：DMSO=5：4：I的冻存效果最好。 [关键词]脂肪来源干细胞；冻存液；液氮 [中图分类号]Q813．1 [文献标志码]A [文章编号]1008—6455(2015)09—0029—05 Effectsofdifferentcombinationscryopreservationofrabb计adiposestem cells werefrozeninIiquidnitrogeneffects YAO Yong—ming1,『ZHANG Fan2,．ZAHNG Ze—rain1,YAN He1,W UCai—feng1,HU Fei11NIU Chang—ying’， YANG Biao—bing’ (1．WeiFangMedicalUniwersity，Weifang261053，Shandong，China2．FeixianPeopleSHospital，Linyi 273400，Shandong，China) Abstract：0bjective ToinvestigatetheabllitytomaintaintheproliferationofAdipose-derivedStem CeIls(ADSCs)in differentc0ncentratiOnratiooffrozen Iiquid．Methods Fatisolated frOm healthy rabbitswasisolated．culturedand thengenerated invitrofor3passage intotheADSCs。P3ADSCs wereidentifiedbydetectingofadiposestem celfsurfacemarkersexpression．Th