Ad5CMVeNOS转导静脉桥对犬颈动脉旁路移植术后血管狭窄影响__--__体外分析及其机制探索.pdf

圭童兰三匡型查兰堕主笙奎!墨塑薹一一一——，————一 疗的研究热点，为此在成纤维细胞水平上进行了转染实验研究。嬉法：用 7细胞，72小时后收集细胞，通过RT—PCR和免疫组织化学方 细胞株PA3l 细胞，在MoI为l 7，并获得蛋白表达。这种作用为重 体外能有效转染小鼠成纤维细胞PA31 组内皮一氧化氮合酶通过血管局部转染，以血管外膜作为治疗途径之一提 供了理论依据。 第三部分：重组腺病毒对不同表达细胞和血管环转染的体外研究j 目的：比较重组腺病毒对不同细胞、特别对血管细胞的转染和对人冠 状动脉旁路移植动脉静脉血管的转导，为携带目的基因的重组腺病毒治疗 和大鼠血管平滑肌细胞，体外转导人胸廓内动脉和人大隐静脉两种血管 环，运用B一半乳糖苷酶活性X-gal组织化学染色，观察转染情况，并进行 初步动态性分析。结果：腺病毒载体能使外源性B～半乳糖苷酶基因有效地 转入HUVEC、PA31 7等细胞，在MOI为100时，感染率几乎达到100％：同 血管环也获得蛋白表达，而且在转染lOd后仍有D一半乳糖苷酶蛋白的表达。岁 结论：从细胞水平上证明了腺病毒载体能将治疗性目的基因导入各种血管 细胞，从组织水平上证明了动脉和静脉血管都获得了蛋白表达。提示不仅 血管内膜和外膜都能被重组腺病毒有效转染；而且从理论上间接说明临床 无论动脉或静脉的血管狭窄都可用腺病毒作为载体进行基因治疗和预防。 第四部分：Ad5CMVeNOS对犬颈动脉旁路移植术后静脉桥狭窄影响及机 制探索? 目的：为冠状动脉旁路移植术后大隐静脉近期和远期血管再狭窄提供 一种有效的基因治疗手段，避免目前使用的血管内加压灌注造成的内皮损 伤和血流冲洗等缺点，更好地进行临床干预和治疗。我们观察了 Ad5C}4VeNOS通过局部转移方法对犬颈动脉旁路移植术后静脉桥血管狭窄 的影响，及从另一方面进行了其机制的初步实验研究。／方法：在一种杂种 犬颈动脉旁路移植手术模型中，观察Ad5CMVe油s(病毒滴度为 2×tO”pfu／mI)局部转移犬颈静脉桥，对血管狭窄的影响：并且通过免疫 组织化学和原位杂交的方法，进行相关机制的研究。结果：旁路移植术后 上海第二医科大学博士论文 中文摘要 (pO．05)；增生的血管内膜中存在转化生长因子TGF—BlmRNA。的激活表 病毒介导的eNOS基因局部转染静脉血管，显著抑制犬颈动脉旁路移植术 后颈静脉桥血管的狭窄；这可能机制与NO产生增多，NO直接或间接地抑 制了TGF—B1分泌及由“潜活前体”形式向激活形式转变，使其激活表达 减少，从而抑制外膜成纤维细胞向肌成纤维细胞分化，及其增生迁移形成 新内膜和血管内向再构有关。 f综合上述实验，通过细胞和血管环组织的体外实验，及进一步的体内 动物实验研究，证明了重组腺病毒体外扩增纯化，得到了实验所需要的高 病毒滴度重组腺病毒；Ad5CMVeNOS转染PA31 7并获得表达，Ad5CMVLacZ 转染HUVEC和PA317都获得蛋白表达，腺病毒作为心血管基因治疗的高效 载体，血管内皮细胞和成纤维细胞都是腺病毒良好的靶细胞：血管环被重 组腺病毒有效转染，说明人乳内动脉和大隐静脉都能作为体内携带目的基 因腺病毒的转染途径：AdSCMVeNOS体内血管局部转移，显著抑制静脉桥的 血管狭窄，这可能机制与NO抑制TGF一13 1分泌及由“潜活前体”形式向 激活形式转变，使其激活表达减少，从而抑制外膜成纤维细胞向肌成纤维 细胞分化，及其增生迁移形成新内膜和血管内向再构有关。应用腺病毒介 导的eNOS基因局部转染治疗血管狭窄具有潜在的l临床使用价值。文 关键词： 重组内皮一氧化氮合酶? 腺病毒载体? 成纤维细胞， 转化生长因子。1 血管狭窄f 7 局部转喙 圭童笙三里型查兰堡圭笙苎茎兰塑墨—— NitricOxide