siRNA抑制ZNF139对人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞凋亡影响及其机制分析.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………“1 英文摘要……………………………………………………………………”5 英文缩写……………………………………………………………………”11 研究论文siRNA抑制ZNFl39对人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞凋亡影 响及机制研究 OOOO……·……………···…···O””””…”““”“””””” OOO “““””””””””””“”””””。=z 前言O刖舌 O…………··………·………·…··1。2 材料与方法……………………………………………………………·12 结果……………………………………………………·…·……………22 附图····……······················…············…·“””””···········“”””26 附表……………………………………………………………………··32 讨论…······························································…············34 结论······…·················…·················…········”·····················39 参考文献………………………………………………………………·40 综述鼬蛆干扰对胃癌凋亡相关基因的研究…………………………·43 致谢···························································…············…·········57 个人简历……………………………………………………………………”58 中文摘要 siRNA抑制ZNFl38对人胃癌裸鼠原位移植瘤细胞凋亡影响及机 制研究 摘 要 目的：胃癌是一种常见的恶性肿瘤，严重威胁着人类的健康。近年大 量研究表明，锌指蛋白Kriippel家族中的许多成员可以通过调控凋亡相关 家族成员。本课题组前期研究表明：ZNFl39在大多数胃癌中高表达，与 胃癌的发生、发展密切相关。而ZNFl39基因的表达与胃癌细胞凋亡及凋 亡相关基因Bax、Bcl一2的表达是否有关尚无报道，有待于通过实验进一 裸鼠原位移植瘤中ZNFl39基因的表达，以观察研究其对人胃癌裸鼠原位 移植瘤细胞凋亡水平的影响，探讨ZNFl39与胃癌细胞凋亡的关系及机 制。 方法： 化科技有限公司设计合成，应用无内毒素质粒大提试剂盒提取重组质粒。 抽提完毕后，所提取的质粒经紫外分光光度仪检测浓度和纯度。利用 RT-PCR方法检测重组质粒siRNA．ZNFl39的沉默效率。 鼠皮下形成的皮下移植瘤组织块为材料，将传代6次的组织块接种在裸小 鼠胃壁浆膜层下，观察裸鼠的生存状态及移植瘤的生长情况。建立人胃癌 细胞株SGC．7901裸鼠原位移植瘤动物模型。 3待肿瘤直径约5ram时，将其随机分为3组，空白对照组、阴性对 照组和实验组，每组5只。1天、3天、5天、7天、9天，利用微量注射 pl，contr01．siRNA20ti 139 器分别将生理盐水50 g，重组质粒siRNA-ZNF 20ug注射入对应组的裸鼠原位移植瘤内。每天观察原位移植瘤的生长情 况。 4在每次对瘤内进行注射前和处死裸鼠剥取原位移植瘤后测量移植 中文摘要 B2，计算肿瘤的近似体积，并制作肿瘤的生长曲线。 5对裸鼠干预5次后，于第11天颈椎脱臼处死全部裸鼠，完整剥离 瘤体，称取瘤重，以计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率=(对照组瘤重一实验组 100％。 瘤重)／对照组瘤重X 6处死裸鼠，完整剥离瘤体后，取少量新鲜瘤体标本，制作单细胞悬 液，利用MTT法测定