sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及其抗肿瘤活性分析.pdf

分类号 Q塑! 密级 学校代码 10542 学号 201202141178 sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及 抗肿瘤活性研究 ，1 ·- ’ · n ● 。● Lonstructionand expression vectorofsoluble expression TNF··related SiSOtOoinducin2padligandna di‘t1s poptosis indlgligand -- I -‘ anti-tumor activity 研究生姓名 王世奇 导师姓名、职称 张友明教授 研 究 专 业 微生物学 研 究 方 向 微生物DNA工程 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年四月 万方数据 摘要 肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TNF．related apoptosisinducing 的一种蛋白分子。TRAIL蛋白能特异的与某些肿瘤细胞表面的凋亡 受体结合，从而诱导肿瘤细胞凋亡，且不诱导正常细胞和组织凋亡， 也不像已发现的细胞凋亡因子TNF—cc会产生严重的炎症反应。TRAIL 蛋白这一关键特性的发现，使其成为目前肿瘤治疗研究中的热点。完 整的TRAIL蛋白含有281个氨基酸残基，但其完整的蛋白分子在原 14．281 核细胞中可溶性低，限制了其的应用。但TRAIL蛋白分子的1 TRAIL，sT凡UL)在原核表达中的可溶性大 位氨基酸片段(soluble 大提高，且保持了活性。利用微生物作为宿主表达抗肿瘤外源蛋白， 原因在于大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、表达量较高，利于发 酵制备物的提取、纯化、控制等优点，研究工作目益受到重视。 本研究通过培养人早幼粒白细胞HL．60细胞，提取总RNA，通 诱导转速以及IPTG浓度的优化，确定了在16℃、IPTG浓度为0．ImM、 诱导时间12h的诱导条件下可溶蛋白含量最高。通过优化Ni—IDA层 析柱纯化重组蛋白条件，SDS．PAGE蛋白电泳以及胶内酶解质谱鉴 1)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人肝癌细 人乳腺癌细胞(MDA．MB．23 等肿瘤细胞有良好的抑制效果，通过MTT法检测，在sTRAIL蛋白 浓度为1200 h后，对上述细胞的抑制率分别为32．9％、 nedmL，作用48 27．2％、29．7％、22．5％和10．8％，存在浓度依赖性。从倒置相差显微 镜观察发现，越来越多的肿瘤细胞从梭形或不规则形态转变为圆形， 且细胞变厚，透光率发生变化。同时sTRAIL蛋白对正常的人脐静脉 内皮细胞(m．ⅣEC)未发现细胞毒性。 万方数据 抗肿瘤活性进行了研究。sTRAIL蛋白