天然产物混合物结构鉴定的MS和NMR平行动态谱与正交相关谱新型研究方法分析.pdf

中国医学科学院 北京协和医学皖 博1j论文 摘 要 本论文基于不完全分离的新型分析策略，结合化学计量学方法，主要采用 数据进行了整合分析，探索并建立了两个互补的新型谱学分析方法，即LC．MS与 CHS)。 1H PDS)和正交相关谱(NM刚LC．MS NMR的平行动态谱(NM刚LC—MS 通过从混合物谱中发掘出来自提取物中同一组分的LC—MS和NMR谱数据间的内在 相关性，获取包括保留时间(Rt)、质荷比(，砒)和化学位移值(6)等相关且互补的 关键谱学数据，实现了中草药物质基础中多组分无需完全分离，高效、多容量的快 速结构分析鉴定。为了建立本分析方法，首先采用结构已知的黄酮类标准品模拟不 完全分离的色谱情形，设计并配制了组分含量呈连续动态变化且色谱重叠程度不同 PDS 的两组人工系列混合物样品进行探索研究。在此基础上，综合运用NM刚LC．MS 和NM刚LC．MSCHS这两个谱学分析方法对具有抗老年痴呆和抗血栓活性的草棉 植物活性提取物AB．8．2中黄酮醇类成分进行了不完全分离的同步结构鉴定研究， 共分析确认了12个组分的结构，其中包括2组共流出的同分异构体。此外，初步 开发了以MATLAB软件为基础的数据分析及可视化工具。 本论文的研究内容主要包括以下四个部分： 1．不完全分离的分析策略 通过计算机模拟了几类具有代表性的不完全分离系列混合物的色谱分离情形， 并以组分谱学信号强度间的相关系数为指标，分别考察了系列混合物的色谱分离度、 组分相对含量，组分数目和谱学信号重叠对相关系数的影响。研究结果表明，组分 浓度和组分数目对相关系数的影响不明显，但是谱学信号重叠会降低谱学信号间的 相关系数，而相邻两个组分间的分离度对其相关系数具有决定性的影响。相比于完 全分离的色谱分离度(R=1．5)，本研究提出的不完全分离的分析策略其特点之一是 对于药用植物复杂混合物体系的分析，降低了对色谱分离度的要求，其关键是在一 定程度的色谱不完全分离情形下，获取组分含量呈连续动态变化的系列流份，以保 证系列混合物样品中组分间的相关系数要小于同一组分的自相关系数。另外，鉴于 自动化的多通道组合闪式色谱分离系统具有中等的分离度和较大上样量的特点，本 研究重点采用该技术来获取所需的组分含量呈连续动态变化的系列提取物样品。 中雨医学}1}学院北京协秘医学院 博’：论文 2．NMR与LC．MS平行动态谱和正交相关谱分析方法的建立 采用6种结构已知的黄酮类标准品，模拟不完全分离的色谱情形，设计并配 制了组分含量呈连续动态变化且色谱重叠程度不同的两组人工系列混合物。然后分 别进行了Lc．Ms和1HNMR谱测定，并采用MATLAB软件编写的数据处理程 序，对原始实验数据进行处理与分析。基于不完全分离的系列混合物样品中多个组 分的浓度及其分布范围具有规律地连续动态变化的特征，将具有信号强度协同变化 的多个LC—MS和1HNMR谱平行相关及可视化，从而构成了NMR／LC．MS平行 动态谱(NM刚LC．MSPDS)。在此基础上，运用化学计量学算法获取系列人工混合 物组分的LC．MS和1HNMR谱信号强度间的相关系数，并设定合适的相关系数 截取值构成了NMR／Lc．MS正交相关谱(NM刚LC．MSCHS)。通过发现混合物中 同一组分的质荷比(朋店)和化学位移值(6)间的相关性信息，实现了混合物组分 的分子离子，碎片离子，化学位移值和偶合裂分等关键结构信息的获取。 其中，通过NM刚LC．MSPDS谱的可视化处理，观察到信号强度变化范围及趋 势的精细特征，从而对重叠的1HNMR信号进行了识别和解卷积分析。此外利用不 同颜色显示的xIC谱数据直观地观察到混合物样品中同分异构体的组成情况。还可 以指导数据处理过程中化学位移值的分组及1HNMR信号峰对齐处理。通过对