丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制.pptVIP

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丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制 主讲人:葛静 制作人:胡波 实验目的 实验原理 实验材料与仪器 实验步骤 实验结果记录 注意事项 实验讨论 实验目的: 1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。 2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。 PPT模板下载:/moban/ 行业PPT模板:/hangye/ 节日PPT模板:/jieri/ PPT素材下载:/sucai/ PPT背景图片:/beijing/ PPT图表下载:/tubiao/ 优秀PPT下载:/xiazai/ PPT教程: /powerpoint/ Word教程: /word/ Excel教程:/excel/ 资料下载:/ziliao/ PPT课件下载:/kejian/ 范文下载:/fanwen/ 试卷下载:/shiti/ 教案下载:/jiaoan/ 实验原理 化学结构与酶作用的底物结构相似的物质,可与底物竞争结合酶的活性中心,使酶的活性降低甚至丧失,这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 E+S ES E+P + I EI+S EIS + I 琥珀酸脱氢酶: 是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶,其辅基为FAD,如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用 实验材料与仪器: 器材 : 大白鼠、 手术剪、滴管 镊子、纱布、 漏斗、量筒、 烧杯、研钵 刻度吸量管 试管及试管架、 恒温水箱、 试剂: 0.2mol/L琥珀酸溶液、 0.02mol/L琥珀酸溶液 0.2mol/L丙二酸溶液 0.02mol/L丙二酸溶液、 1/15mol/LPH=7.4磷酸盐缓冲液、 0.02%甲烯蓝 1、酶提取液的制备:取大白鼠的骨骼肌,用冷水洗3次,加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH 在7.4。在研钵中碾碎,然后用纱布过滤,用干净的烧杯收集过滤的备用。 实验步骤: 2、取试管6支,编号,在按图步骤操作 酶提取液(ml) 磷酸缓冲液(ml) 0.2mol/L琥珀酸(滴) 0.02mol/L琥珀酸(滴) 0.2mol/L丙二酸溶液(滴) 0.02mol/L丙二酸溶液(滴) 蒸馏水(滴) 甲烯蓝(滴) 褪色时间(分钟) 试管1 2 — 8 — — — 8 3 试管2 2 — 8 — — 8 — 3 试管3 2 — 8 — 8 — — 3 试管4 2 — — 8 8 — — 3 试管5 — 2 8 — — — 8 3 试管6 2 — 8 — — — 8 3 试管6:酶提取液在100℃ 水浴中保温 3.各管溶液立即混均匀,沿试管壁加入液 体石蜡,约0.5cm,各管置于37℃的水 浴中保温,切勿摇动试管,随时 观察比较各试管颜色的变化, 记录褪色时间。 实验结果记录: 褪色时间(分钟) [I]/[S] 试管1 试管2 试管3 试管4 试管5 试管6 【注意事项】 : 1、酶提取液的制备应操作迅速,以防止酶活性降低。 2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气,以避免空气中的氧气对实验造成影响,因此加石蜡时试管壁要倾斜,注意不要产生气泡。 3、37℃水浴保温过程中,不能摇动试管,避免空气中的氧气接触反应溶液,使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。 4.、37℃水浴保温过程中,要注意随时观察各试管的褪色情况。 5、实验结果结束后,一定要洗干净试管内的液体石蜡。 实验讨论: 1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性,表1所示,在试管1中没有抑制剂,但琥珀酸依然能脱氢,使得甲烯蓝反应得甲烯白。 2、各管的褪色有明显的时间差别,褪色时间随[I]/[S]逐渐增大,而增大。 3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制,其特点:最大反应速率Vmax不变,米氏常数Km增大,竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。 4、本实验中5号、6号试管的作用是做对照,5号试管和1号试管做对照,说明酶提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在,6号试管中的酶提取液在100℃的水浴加热煮沸过,所以琥珀酸脱氢酶是失活的。

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