鸡传染性法氏囊病血清抗体间接ELISA检测方法的建立.pdfVIP

中国锄物耗瘦 鸡传染性法氏囊病血清抗体间接 ELISA检测方法的建立 张 华 ～，南文龙 ，巩明霞 ，张悦勇 ～，彭大新 ，陈义平 (1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032； 2．扬州大学兽医学院，农业部畜禽传染病重点开放实验室，江苏扬州1225009； 3．青岛农业大学，山东青岛 266109) 摘 要：为建立可检测鸡传染性法氏囊病血清抗体的间接ELISA检测方法，本研究经RT-PCR扩增IBDVVP2 (1nt一708nt)基 因片段，并应用pET28a载体进行原核表达，亲和层析纯化重组蛋白作为包被抗原，建立检测 IBDV血清抗体的间接ELISA方法。应用所建方法和 IDEXX试剂盒，对采 自不同地区的 156份鸡血清样品进 行平行检测和比较。结果表明，RT-PCR扩增获得708bp的VP2基因片段 ；含重组表达质粒pET28a—VP2的大 肠杆菌BL21经 IPTG诱导后，表达了约27kDa的VP2重组蛋白，表达量约占菌体蛋白的30．1％；建立的间接 ELlSA检测方法与IDEXX试剂盒比较，其特异性、敏感性和符合率分别达到90．24％、95．65％和 94．23％。由 此可见，本研究所建立的间接 ELISA方法敏感、特异，适用于 IBDV血清抗体的检测。 关键词：传染性法氏囊病；VP2；原核表达；间接 ELISA 中图分类号：$852．657 文献标识码：A 文章编号：1005—944X (2015)09．0072．05 Developm entofanIndirectELISA fortheDetectionofAntibodiesagainst InfectiousBursalDiseaseVirusinChickens ZhangHua’2 NanWenlong。GongMingxia，ZhangYueyong，3 PengDaxin ，ChenYiping (1．ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao，Shandong266032；2．KeyLaboratoryofAnimal InfectiousDiseases， MinistryofAgriculture，CollegeofVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity，Yangzhou， Jiangsu225009；3．QingdaoAgriculturalUniversiyt，Qingdao，Shangdong266109) Abstraet：InordertodevelopanindirectELISAforthedetectionofantibodiesagainstIBDV， VP2gene (1nt-708nt) wasamplifiedbyRT_PCR andexpressedusingthepET-28avectorinEscherichiacoliBL21．Therecombinantprotein waspurifiedthroughNi—chelatingaffiniytchromatographyandbasedonit，anindirectELISAwasdeveloped．Toverify theperformanceofthisassay， 156clinica1serum samplesweredetectedbytheassayandIDEXX ELlSA kitinparal— le1．TheresultsshowedthatVP2genewassuccessfullyamplifedbyRT_PCR andexpressedinE．coliBL21withIPTG induction．ComparedtoIDEXX ELISAkit， thespecificity， sensitivity，andcoincidencerat