减毒沙门菌携带CWP2-S基因抗贾第虫口服疫苗的免疫原性.pdfVIP

中国兽医杂志 2015年(第51卷)第9期 29 CWP一2)是贾第虫包囊囊壁的主要成分蛋 白，在 海生工生物工程技术服务有限公司测序 。 贾第虫滋养体成囊过程中，由滋养体分泌产生并 1．5 重组减毒沙 门菌SL7207／pVAX1-CWP2一s体 渗入囊壁 1。研究表明，以CWP一2作为抗原构建 外 稳 定 性 试 验 将 携 带有 重 组 质 粒 pVAX1一 的疫苗 ，可有效减少包囊的排出[6-71o因此CWP-2 CWP2一S和质粒pVAX1的减毒沙门菌分别在无抗 作为疫苗候选分子 ，可有效抑制成囊 ，切断贾第 生素和含有30mg／mL卡那霉素的LB培养基 中连 虫传播。但是 ，完整的CWP一2含有膜绑定单位 ， 续培养 168h(7d)，每 12h分别从各培养体系中 很难得到可溶性的表达 ，因此限定了CWP-2的应 吸取50 L，涂布于含有 30mg／mL卡那霉素的LB 用。本研究通过序列分析，获得CWP-2蛋 白的可 琼脂培养板上 ，37℃过夜培养 ，通过对比计数两 溶性表位 ，并以减毒沙门菌为载体构建抗贾第虫 种培养基菌落的数量来计算质粒携带的稳定性。 口服疫苗，以期获得 良好的免疫效果。 1．6 小鼠口服免疫与样本收集 6--~8周龄清洁 级雌性 BALB／c小 鼠，随机分为3组 ，每组 1O只。 1 材料与方法 适应性培养 1周后，分别 口服0．1mL含有 lxlO的 1．1 贾第虫虫株与菌株 由本室液氮保存 ，试验前 SL7207／pVAX1-CWP2-S(组 1)、SL7207／pVAX1(组 复苏虫体，贾第虫滋养体用改良含有10％胎牛血清 2)和0．1mL的无菌 1~PBS(pH值7．0)(组3)。免 和5％脱水牛胆汁的TY1一s一33培养基培养、传代嗍。 疫前禁食 ，期间仅喂饲 2％碳酸氢钠水。第2周 ， 鼠减毒沙门菌SL7207株菌的培养基为LB。 加强 口服免疫 1次 ，于免疫后第8周 ，眼球取血处 1．2 试剂与仪器 TYI—S一33培养基的主要成分 ， 死小 鼠，收集血清和小肠灌洗液进行抗体检测 ， 购 自美国Sigma公司；小牛血清，购 自杭州四季青 分离肠系膜淋巴结。 生物技术有限公司 ；DNA标志物和pGEM—T和 1．7 CWP2一S在小 鼠体 内表达的检测 各组肠系 pVAX1载体 ，购 自北京鼎国昌盛生物技术有限责 膜淋巴结标本经石蜡包埋 ，切片，以抗rCWP2一S 任公司 ；重组CWP2蛋 白和抗rCWP2一S兔血清 由 兔血清为一抗 ，以生物素化羊抗兔IgG为二抗 ，进 本室制备 ；小量质粒提取试剂盒 ，购 自美 国Pro． 行免疫组化检测。 mega公司；主要仪器包括PCR扩增仪 (Thermo公 1．8 口服免疫小鼠血清特异性IgG和小肠灌洗液 司)，紫外分光光度计 (美国Bio—rad680)等。 特异性SIgA抗体滴度检测 用