定向偶联制备三肽囊素人工抗原及其多克隆抗体的研制.pdfVIP

江西农业大学学报 2013，35(1)：0156—0160 jhttp：／／xuebao．jxau．edu．cn ActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensis E —mail：ndxb7775@ sina．corn 定向偶联制备三肽囊素人工抗原 及其多克隆抗体的研制 邓舜洲，冷 闯，张文波，许昌满，胡 杨，邹 柳，邬向东，谌南辉 朱芝秀 (江西农业大学 动物科学技术学院，江西 南昌 330045) 摘要：为研制三肽囊素(Bu~in，KHG—NH：，BS)抗体，采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体 蛋白(BSA、OVA)定向偶联，分别制备免疫抗原 (BSA—KHG—NH：)和检测抗原 (OVA—KHG—NH2)。以BSA—KHG- NH 免疫5只BALB／c小鼠，经4次免疫后，均产生了较高的抗体水平，其中5号小鼠血清抗体效价达 1：125000。免 疫小鼠血清多克隆抗体与检测抗原的结合不仅能被三肽囊素阻断 ，而且能被 GKHG．NH，四肽特异性阻断，但 不能被KHGK四肽阻断，表明本试验制备的三肽囊素人工抗原是 由载体蛋 白的羧基与三肽囊素分子赖氨酰 (K)上的氨基定向偶联而成。利用小鼠多克隆抗体建立了三肽囊素间接竞争 EIISA检测方法 ，线性范围为 l5 — 1000ng／mL，ICsn为 160n mL。 关键词：三肽囊素；人工抗原；多克隆抗体；间接竞争ELISA 中图分类号 ：Q785 文献标志码：A 文章编号 ：1000—2286(2013)01—0156—05 PreparationofArtificialAntigenbyConjugationtotheAminoGroupon LysineofBursinandProductionofPolyclonalAntibodiesagainstBursin DENG Shun—zhou，LENG Chuang，ZHANG Wen—bo，XU Chang—man， HU Yang，ZHUO Liu，W U Xiang-dong，CHEN Nan—hui，ZHU Zhi—xiu (CollegeofAnimalScienceandTechnology，JAU，Nanchang330045，China) Abstract：InordertoproducepolyclonalantibodiesagainstBursin，anddevelopimmunologicaldetective methodsforBursin(BS)，theaminogroupon—LysofBursinmoleculeswereconjugatedtobovineserumal— bumin(BSA)orchickenovalbumin (OVA)byEDCmethod．Thetiterofanti—Bursinantibodiesinone BLAB／cmiceseurm，immunizedbyBSA—KHG—NH2，wasaboutl：125000，inwhich polyclonalantibodies bindingtoOVA—KHG—NH2couldbeinhibitedbyfleeBursinandGKHG—NH2，couldnotbeinhibitedbyKH— GK peptide．Theseresultsindicatedthattheimmunizedmiceproducedspecificalantibodiesagainstbursin， andtheaminogroupon—LysofBursinwereconjugatedtoBSAorOVA．AcompetitiveindirectELISA (CI— ELISA)withtheanti—BursinpolyclonalantibodiesofrdetectingBursinwasdeveloped，inwhichthelinear rangeoftheinhibitioncorvewas15—1000ng／mL，andtheIC50was160 ng／mL． Keywords：Bursin；artificialantigen；polyclonalantibodies