利莫那班对肝星状细胞增殖和凋亡影响及作用机制.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要 …………………………………………………………………5 研究论文利莫那班对肝星状细胞增殖和凋亡的影响及作用机制 前言…………………………………………………………………10一刚舌 …………………………………………………………………l 材料与方法…………………………………………………………11 结果 …………………………………………………………………25 附图 …………………………………………………………………29 讨论…………………………………………………………………40 结论…………………………………………………………………42 参考文献……………………………………………………………42 综述 内源性大麻素系统对肝硬化的影响………………………………47 致谢………………………………………………………………………57 个人简历…………………………………………………………………58 中文摘要 利莫那班对肝星状细胞增殖和凋亡的影响及作用机制 ’摘 要 肝纤维化是世界范围内的健康问题，目前还没有有效的治疗方法。肝 stellate 星状细胞(hepatic 色，在过去的二十年中，通过研究HSC来探讨肝纤维化已成为一种重要 趋势。随着肝脏损伤，HSC被激活并增殖，进而产生以I型胶原为主的 细胞外基质(extracellular 间隙内的ECM内，随着时间的进展，内皮细胞下的ECM发生变化。最 初ECM主要由Ⅳ型胶原、类肝素硫酸蛋白聚糖和层粘连蛋白组成，其中 层粘连蛋白是基底膜的组成部分。随后，ECM变的富含纤维蛋白成分， 特别是I型和III型胶原。 Raf／细胞外信号调节激酶(Extracellular regulated adhesion 粘着斑激酶(focal (phosphatidy7linositol (70．kDaribosomalS6 录、蛋白的分泌、细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。血小板源性生长因子 (platelet．derivedgrowth 而激活P13K。 内源性大麻素系统包括大麻素受体、大麻素系统配体和调节大麻素受 体和配体相关蛋白。已经克隆和鉴别出两个大麻素受体，即大麻素受体1 (cannabinoid 1，CB receptor receptortype type 是口服的。通过动物体内试验和体外细胞试验发现内源性大麻素系统可以 通过调节重要的细胞信号通路而调节肿瘤细胞的生长。也有实验研究发现 内源性大麻素系统在肝纤维化的形成过程中扮演着重要角色。在用四氯化 碳注射制造肝纤维化的模型中，大麻素受体2基因敲除小鼠更易发展形成 纤维化，而在大麻素受体1敲除的小鼠中，肝纤维化的形成较轻。目前， 已经有许多关于CBl和肝纤维化的研究，然而，CBl拮抗剂利莫那班对 体外肝星状细胞的影响及其机制还没有研究，如利莫那班对HSC增殖的 中文摘要 影响，凋亡的影响和胶原的影响。 目的：我们探讨利莫那班对HSC．T6细胞和原代HSC增殖的影响， 探讨利莫那班对HSC．T6细胞凋亡和胶原分泌的影响，我们还通过在10％ bovine 胎牛血清(fetal 影响。我们进一步研究利莫那班对HSC影响的机制，及是否通过抑制ERK 和FAK的磷酸化产生的这些影响。 方法：细胞增殖行MTT分析。通过实时荧光定量PCR检测CBl、 ERK和FAKmRNA的表达，通过Western blot方法分析ERK、P．ERK、 FAK和P．FAK蛋白的表达。通过流式细胞术和透射电镜技术检测细胞凋 活性。透明质酸(hyaluronic