第一节原核生物与真核生物DNA的复制精品.pptVIP

第一节 原核生物与真核生物DNA的复制 内容提要： ● DNA的半保留复制 ●与DNA复制有关的物质 ● DNA的复制过程（大肠杆菌为例） ● DNA复制的其它方式 ●真核生物中DNA的复制特点 1、定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。 （二）与DNA复制有关的物质 1、原料：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、 dCTP、dTTP) 2、模板：以DNA的两条链为模板链，合成子代DNA 3、引物：DNA的合成需要一段RNA链作为引物 4、引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 5、 DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶 ●以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物 ●反应需要有模板的指导 ●反应需要有3?-OH存在 ●DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ? 原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌） 真核生物中的DNA聚合酶 α β γ δ ε 定位 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 3‘-5’ 外切 - - + + + 酶活性 功能 6、DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用 7、DNA 拓扑异构酶(DNA Topisomerase)： 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。例：大肠杆菌中的ε蛋白 拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。 例：大肠杆菌中的DNA旋转酶 7、DNA 解螺旋酶 /解链酶（DNA helicase) 通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。 E.coli中的rep蛋白就是解螺旋酶，还有解螺旋酶I、II、III。 9、单链结合蛋白(SSBP-single-strand binding protein)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 （三）DNA的复制过程（大肠杆菌为例） 双链的解开 RNA引物的合成 DNA链的延伸 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 复制方向和速度： 双链解开、复制起始 DNA的半不连续复制（semi-discontinuous replication) DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制。 在DNA复制过程中，前导链能连续合成，而滞后链只能是断续的合成5??3 ?的多个短片段，这些不连续的小片段称为冈崎片段。 双链环状、θ型复制、双向等速 （五）真核生物中DNA的复制特点 1、真核生物每条染色体上有多个复制起点，多复制子 2、真核生物染色体在全部复制完之前,各个起始点不再重新开始DNA复制；而在快速生长的原核生物中，复制起点可以连续开始新的复制(多复制叉)。真核生物快速生长时，往往采用更多的复制起点。 3、真核生物有多种DNA聚合酶。 d. 不同的发育时期，真核的复制起始点和复制子的大小会变化。 真核生物DNA聚合酶及有关蛋白 2 SV40复制 双链环状DNA，具有核小体，全长5243bp 2.1 复制起始区：具有2个位点 位点2包括以下： 10bp的前期区， 27bp的T抗原结合位点，含GAGGC 17bp的A-T丰富区。 3 酵母的自主复制区 ARS(autonomously replicating sequence)序列，在酵母染色体复制和质粒复制中均发挥复制起点的功能。 ARS1分为A,B,C三个功能区： A区：15bp，其中11个保守，称ACS ： 5′ATTTAT（T/C）TTTA 3′ 有复制起始子的功能。 B区：约80bp,含B1,B2,B3三个区。 B3：ABF1（ARS-binding factor 1）结合区 （2）端粒酶： 首先在四膜虫中发现 端粒酶：特殊的反转录酶，由蛋白质和RNA组成。 端粒酶以自身携带的150bp的RNA为模板，在随从链模板DNA的3′OH末端延长DNA，再以这种延长的