昆虫细胞基因工程人生长激素的纯化与性质的分析.pdfVIP

摘 要 真核细胞基因工程合成的重组人生长激素 (recombinanthumanGrowth Hormone rhGH)在医学和农业领域具有很大的应用价值。本实验运用疏水 相互作用色谱和免疫亲和色谱对昆虫细胞杆状病毒表达系统 (朋-AcNPV) 表达的重组人生长激素进行了纯化。含有rhGH的昆虫细胞培养液经离心后， 以疏水相互作用色谱 (PhenylSepharoseCL-4B)浓缩，有效地去除了杂蛋白， 得到rhGH粗提品;再经过免疫亲和色谱纯化，得到了高纯度的rhGH。经放 射免疫法和Western杂交法分析，证明纯化的rhGH与天然的人生长激素有相 同的免疫活力;经SDS凝胶电泳测定其分子量为:22,000道尔顿;等电点聚 焦法测定其等电点为:4.9。这些性质均与天然的人生长激素相符合。 关键词: 重组人生长激素 纯化 昆虫细胞杆状病毒表达系统 疏水相互作用色谱 免疫亲和色谱 放射免疫分析 Western杂交 南开大生项大生俱诊客、__垦遨翅月包鉴因子程人生玉邀幸}5}.}t;垒t}遗}匹 gas要 Abstract Biosyntheticrh0H (recombinanthumanGrowthHormone)byeukaryotic geneticengineeringisofgreatpotentialvalueinmedicalandagriculture application.ThemethodusingHIC(HydrophobicInteractionChromatography) andAffinityChromatographytopurifyrhGHexpressedbyinsectcell(SP-AcNPV) expressionsystemwasreportedinthispaper.HICwasusedastheinitialstepfor theconcentrationandpartialpurification.TherhGHwasextractedbybatch absorptiontoPhenylSepharoseCL-4Brfom insectcellculturemedium after centrifuged.Thenthegelwasdecantedandpackedintoacolumnforelution Thisinitialwork-upprocedurerenderedaconcentratedrhGHsolution.The followingstepwasAffniityChromatography,whichshowsthehighefficiencyof purificationandrecovery. Theproductwasdeterminedtohaveidentical immuitiveactivitywithnativeonebyRadioimmunoassay(RIA)andWestern blottingrespectively.ThepurifiedrhGHwasdeterminedtohavemolecular weightof22,000daltonsbySDS;isoelectricpointofpH4.9byisoelectric focus.AllofthesecharacterizationsconformtothoseofthenativehGH. KeyWords:recombinanthumanGrowthHormone(rhGH) Purification Insectcell-virus(SJ9-AcNPV)system HydrophobicInteractionChromatography(HIC) AffinityChromatography Radioimmunoassay(RIA) WesternBlotting 鱼迁k崖skt}-4鱼z 昆虫细胞基因工程人生长