产柚苷酶的黑曲菌株的筛选、产酶特性及高产菌株选育的研究.pdf

产柚苷酶的黑曲霉菌株的筛选、产酶特性 及高产菌株选育的研究 摘 要 柚皮苷是一种二氢黄酮类化合物，是芸香科植物，如葡萄柚、蜜柚、酸橙等的主要苦． 味物质。柚类果实中的柚皮苷含量在100 ppm370ppm之间，使得在制成果汁时，让消 费者难以接受，这严重影响了柚类果汁行业的发展。柚皮苷的苦味脱除的方法主要有：吸 附脱苦法、化学脱苦法、B．环糊精包埋法、酶法等。其中，利用微生物产生的柚苷酶进行 脱苦具有条件温和、无污染、无次级产物等优点，是最具前景、最理想的脱苦方法。目前 市场上还缺乏可应用于工业化生产的商品酶，其主要原因是缺乏产柚苷酶的高产菌株。 在前期研究中，本实验室以从蜜柚中提取的苦味物质为唯一碳源配制选择性培养基， 分离获得了40株能利用柚皮苷的微生物。本研究从这些菌株中筛选产酶活力高、安全性 高的菌株，研究其产酶性质，选育柚苷酶的高产菌株，为后续研究提供基础。 对40株产柚苷酶的微生物进行筛选，柚苷酶活力相对较高的三菌株的编号分别为 U／mL，103．6U／mL、114．3U／mL。经初 DB054、P．127和4．4．1，柚苷酶活力分别为108．6 Lk．ex Lk．ex^)。 n)，菌株4．4．1为镰孢霉属(Fusarium 对黑曲霉DB054产柚苷酶特性研究，确定了菌株产生的柚苷酶为胞外、诱导酶；分析 了菌株DB054在摇瓶及5L发酵罐中的产柚苷酶规律。黑曲霉DB054存在分解代谢物阻 遏，葡萄糖对柚苷酶的合成具有强烈的抑制作用；黑曲霉DB054的菌丝体形态对柚苷酶合 成有重大影响，丝状菌体比球状菌体更适合发酵柚苷酶。通过改变摇床培养方式或培养基 中添加乳化剂可以改变菌丝形态或细胞膜结构，提高细胞膜的通透性，促进在细胞内合成 的柚苷酶分泌到胞外。 对黑曲霉DB054进行人工诱变育种研究，以期筛选到产柚苷酶的高产菌株。用30 h的黑曲霉DB054孢子诱变处理40min，在培养基中添加5 江／mL甲基磺酸乙酯对出芽8 HC值初步筛选柚苷酶高产菌株。用透明圈法初筛出的菌株中，产量提高40％以上的突变 菌株占11％；用摇瓶培养对初筛出的菌株进行两轮复筛柚苷酶高产突变株T-226，摇瓶培 L罐发酵实 养柚苷酶活达373．4U／mL，比出发菌株提高了22．7％。对该高产突变株进行5 验，在发酵第84h测得柚苷酶活为631．9U／mL。用新建立的方法选育高产柚苷酶的高产菌 株，不仅具有较高的筛选效率，还具有良好的准确性。 关键词黑曲霉，柚苷酶，鉴定，产酶特性，诱变育种，发酵 and of strainfrom breedinghigh·yield Aspergillusniger Abstract inthecitrus ofRutaceae 7-rhamnoghcoside)ispresent plant family, Naringin(naringenin flavonoidis farthemostbitter．The orange．This by speciallygrapefruit,Guanximiyou,bitter concentrationinthePomelofruitisfrom100 hasbeena limitation