反式脂肪酸诱导皮细胞损伤和凋亡作用机制的研究.pdf

摘要 摘 要 反式脂肪酸(transacid，TFA)是加工油脂类或含油脂类的加工食品 fatty 中常见的一种组成成分，有很多研究都报道了TFA与心血管疾病存在密切关系， 但TFA对心血管的作用机制仍不清楚。内皮细胞损伤是动脉粥样硬化(AS)及 其他许多心血管疾病的始动环节，内皮细胞损伤在AS的发生、发展过程中占有 重要地位。另外，内皮细胞凋亡过度是内皮细胞损伤初始环节，在动脉粥样硬 化的早期扮演了重要角色。 目前在国内外针对TFA对动脉粥样硬化和心血管疾病的研究主要集中在内 皮细胞损伤和内皮细胞凋亡两个方面，并且国外大部分研究主要以反式脂肪酸 的混合物为主体对冠心病及动脉血管功能作用进行研究，很少分别研究不同饱 民膳食中TFA含量呈逐年增高的趋势，而我国对TFA与人体健康关系的研究甚 少，本课题针对不同饱和度trans．18：1，trans．18：2研究其与动脉粥样硬化和心 血管疾病的关系，通过内皮细胞损伤和凋亡两个途径来研究TFA对内皮细胞的 作用机制，为研究TFA对血管壁细胞的影响及其与动脉粥样硬化的关系提供理 论依据，为我国心血管疾病的预防提供科学数据，具有重要的理论和社会价值。 本实验采用MTT法检测TFA对内皮细胞存活率的影响，初步确定TFA对 内皮细胞损伤；通过检测NO、NOS、MDA、SOD等相关损伤指标的变化，观 化，定量检测TFA对内皮细胞的损伤作用；采用流式细胞仪检测TFA诱导内皮 细胞凋亡的比例，用激光共聚焦显微镜结合荧光染色，观察TFA诱导内皮细胞 凋亡的形态学变化，最后通过检测参与死亡受体通路和线粒体通路的的酶 CaSpase．3、．8、．9等，综合探讨TFA诱导内皮细胞凋亡的机制。具体结果如下： 1．9t C18：1和9t，12tC18：2两种不同饱和度的TFA均能抑制HUVEC的存活 率，并使细胞的形态发生明显改变，呈现典型的损伤状态； 2．TFA能使细胞损伤的典型指标LDH渗出量增加，降低细胞的SOD活力， 使细胞的清除自由基的能力减弱，进而使细胞的脂质代谢产物MDA的含量增 加。形态和生化指标表明TFA造成内皮细胞损伤； II 摘要 3．LNAME与TFA联合处理内皮细胞比对照组和TFA单独处理组细胞存 活率都显著下降，而SNP与TFA联合处理内皮细胞比对照组和TFA单独处理 组细胞存活率显著升高；TFA可诱导NO分泌水平、内皮型一氧化氮合酶(eNOS) 表达无显著改变。表明TFA通过抑制eNOS活性减少NO的分泌，可能是TFA 诱导内皮细胞损伤的作用机制之一； C18：2均能显著上调黏 4．通过RT．PCR技术，本研究发现9tC18：1和9t，12t 过黏附因子基因的表达诱导内皮细胞损伤； 5．通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜，我们观察到9tC18：1和9t，12t C18：1诱导内皮细 并进而激活Caspase．3而诱导内皮细胞凋亡。本研究为研究9t 胞凋亡的机制提供了详实的科学数据，为研究TFA导致动脉粥样硬化的机理提 供了一定的理论基础； 综合上述结果，表明TFA能够通过NOS-NO系统调控内皮细胞的损伤：并 通过上调相关标志性的损伤黏附因子mRNA的表达，使内皮细胞损伤进一步加 剧；TFA能够通过激活死亡受体通路和线粒体通路诱导内皮细胞凋亡。 关键词：反式脂肪酸；人脐静脉内皮细胞；损伤；NOS-NO系统：凋亡；Caspase III Abstract ABSTRACT Trans acommonconstituentand fattyacids(TFA)is of oil